MSC污染

aristolal23

要说明一下出现的污染是什么污染，细胞污染可能是多方面的原因造成的，如人员操作、环境是否无菌、分离培养 ...
* J2 u" S9 z, Gyuangaoqian 发表于 2010-7-21 15:25

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    个人感觉和我的操作有关，但又不好说，6月之前我取细胞从来都没有过污染，还教别人，但六月以后，噩梦就开始了，唉。
/ T: L; n$ b' ~   污染的情况我没有照照片，下次如果出现再发给你们，之前的情况是有细条的小虫出现，找老师看，说可能是黑胶原虫。还有的情况是细胞长着长着，就有黑点出现。

aristolal23

额，过程木有问题。应该与楼主操作或者培养箱有关吧。
5 j6 `; [; A" n, y; H# W* X4 ~另外，为什么楼主用的是高糖的DMEM，高糖不是会导致 ...
" s+ R5 D0 g$ Z* f/ Pderon 发表于 2010-7-21 15:29

7 w+ x9 ~) T6 X7 K

" p- ~# P2 Q) i+ C0 C3 a  m# {) n; F6 P' a2 j! P
    呵呵，以前一直用高糖了，但感觉细胞状态不错，就没有用过低糖。

anxjs

细胞污染的因素很多，首先你要保证不能发生人为因素引起的污染，主要是操作污染，实验器械或试剂消毒不干净，还有就是实验室工作环境，排除这些因素后，再引起污染，可能就是动物本身问题了。看你的情况，入实验室应该不长，操作要注意了。9 x8 p0 y6 W8 C5 J1 t) l* V
再看看你原代取材过程，首先乙醇用100%就是错误的，消毒一般70-75%，100%是脱水用的。再如果污染频繁，建议大腿去皮，以及把肉撕掉后，用含5%双抗的PBS清洗5min以上。大鼠MSC原代换液，48-72h为佳。96小时偏长了点。

zhmgeneral

一来PBS冲洗没必要冲10次吧？% \! T' x* D/ v7 D& ~' o

; L& j2 y4 H/ ^; n$ ~/ M二来，过多的多余步骤必然带来污染风险
% q( }3 T1 t+ w' m2 d. {; l% D2 Q* \: T* V; T5 c4 b
考虑到你之前操作并不污染，所以建议你对比以前和最近操作的中，所用器械、器材有无变化

daviddow

乙醇75%,   PBS加5-10倍培养基中抗生素浓度

aristolal23

细胞污染的因素很多，首先你要保证不能发生人为因素引起的污染，主要是操作污染，实验器械或试剂消毒不干净 ...: q; V+ j# C/ D+ ^4 H& U
anxjs 发表于 2010-7-21 16:48

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# Q; W, i7 q) T, ]# r% U

$ I% i# a+ @# o/ u9 W" N1 x+ F0 _    哦，好的，谢谢你的建议

aristolal23

一来PBS冲洗没必要冲10次吧？' B& }, u. [- r* V" R  O+ d

- N" ?( n( R8 G二来，过多的多余步骤必然带来污染风险
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$ z& t4 i3 l, @! v- f) z考虑到你之前操作并不污染，所以 ...
2 B( g# D1 E! j% m& H" Jzhmgeneral 发表于 2010-7-21 17:53

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( u) ?6 R5 E$ Y& u* F' K" J% r$ h5 K3 A* n8 r$ J& ]
    恩，好的，谢谢了

aristolal23

乙醇75%,   PBS加5-10倍培养基中抗生素浓度
% U  b( w" q3 J! Vdaviddow 发表于 2010-7-21 17:54

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: s9 X+ c6 B( y0 |3 ?    好的，谢谢了

maozhuxiwo1

* d) ~& K* c3 o- K! p, }7 z/ E1 H" H) q- P7 p0 N
细胞污染 是什么程度的？酒精浓度在75%是杀菌效果最好的。浓度高的酒精会在细菌等表面产生一层膜，不会杀死它
- D: E, A( Z7 l6 d. Z' ?9 }你的800转 是提取的什么细胞啊？我们都是1800  半小时，然后用PBS1800 5分钟洗2此，没有你开头洗那么多次。
! ?6 V! ]1 u% R4 p/ r* \- [1 k8 q' L如果是细胞状态不好，你也可以找找血清的原因，MSC对血清要求特别高。  C4 ~9 c+ k$ W5 B% l8 d
还有就是··· MSC是要用LG养的吧？HG很容易分化的，我们都用阿发MEM/ L5 P' i8 k1 V! q& w
不知道这些能不能帮你找到问题所在