干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

 

 

搜索
朗日生物

免疫细胞治疗专区

欢迎关注干细胞微信公众号

  
查看: 31661|回复: 18
go

MSC污染 [复制链接]

Rank: 1

积分
10 
威望
10  
包包
57  
楼主
发表于 2010-7-21 14:37 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
先谢谢各位同学了,我的情况是这样的,自从6月份以来,每次取MSC的时候都会在不同的时间段出现细胞污染,有的是在原代就出现,有的是长到第一代,或者第二代,小弟非常困惑,希望能得到各位的指点。& J5 S/ i* S8 ~& `
我取的过程大概是这样的。4 q" ~0 n1 Z% l& D' r  R+ I
1 SD大鼠3-4周处死,用乙醇(100%)的浸泡5-10分钟,然后拿到超净台去两个大腿,去皮,用PBS洗十遍,然后用纱布把肉撕掉,再用PBS洗10遍,然后取细胞,我一般取骨垢端以及大腿的骨髓,取完以后放入离心管,800转,8分钟,然后用培养液吹起来,放入六孔板中,一般一个大腿一个六孔板,然后72小时或者96小时以后换液,传代。
$ V0 R$ ~% @3 j6 R" m; y( C我所用的培养液是高糖DMEM,血清是GIBCO的,浓度是10%,加双抗。
2 X/ z. ^" {$ a请大家看看哪里出现问题了。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 2

积分
244 
威望
244  
包包
679  

优秀会员

沙发
发表于 2010-7-21 15:20 |只看该作者
个人认为可将换液时间缩短一些,因为双抗只是抑制细菌的,时间长的话有些细菌就会产生抗药性,那就麻烦了。另外,建议原代的时候提高双抗的浓度。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 7Rank: 7Rank: 7

积分
1666 
威望
1666  
包包
3445  

金话筒 优秀版主 帅哥研究员 博览群书

藤椅
发表于 2010-7-21 15:21 |只看该作者
乙醇75%试一试   PBS加2倍培养基中抗生素浓度  纱布不用  我一般是剪刀和镊子直接上 冲洗出来骨髓后 无菌筛网200目过滤后  离心1000g3分钟 25度  然后重悬 接种一般一只大鼠我接种一个T75 5-7天长的很好
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 7Rank: 7Rank: 7

积分
1666 
威望
1666  
包包
3445  

金话筒 优秀版主 帅哥研究员 博览群书

板凳
发表于 2010-7-21 15:22 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
培养基在加入10%血清和抗生素后 再次过滤 试一试

Rank: 7Rank: 7Rank: 7

积分
1666 
威望
1666  
包包
3445  

金话筒 优秀版主 帅哥研究员 博览群书

报纸
发表于 2010-7-21 15:22 |只看该作者
现在市面上的培养基假货很多

Rank: 2

积分
158 
威望
158  
包包
831  
地板
发表于 2010-7-21 15:25 |只看该作者
要说明一下出现的污染是什么污染,细胞污染可能是多方面的原因造成的,如人员操作、环境是否无菌、分离培养用具是否无菌以及培养基是否无菌等,而且污染也包括多种污染,如微生物、细菌、真菌、支原体、病毒等,有些是认为操作才能造成的,有些是血清等带有的,所以,最好说详细一点,最好附图。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 6Rank: 6

积分
3700 
威望
3700  
包包
15164  

优秀会员 新闻小组成员

7
发表于 2010-7-21 15:29 |只看该作者
额,过程木有问题。应该与楼主操作或者培养箱有关吧。
' o6 h4 C0 y2 f. I另外,为什么楼主用的是高糖的DMEM,高糖不是会导致MSC分化吗
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 1

积分
10 
威望
10  
包包
57  
8
发表于 2010-7-21 16:04 |只看该作者
个人认为可将换液时间缩短一些,因为双抗只是抑制细菌的,时间长的话有些细菌就会产生抗药性,那就麻烦了。 ...
9 g8 V6 c2 l: S; Z, x! @guosapphire 发表于 2010-7-21 15:20
( U9 r3 |) B. D" _2 m3 E

$ \* o$ j# A+ B: f谢谢你的建议
" K% m9 Y# k7 Q& ?    如果换液的时间短了,细胞一般72小时以内细胞感觉帖不上

Rank: 1

积分
10 
威望
10  
包包
57  
9
发表于 2010-7-21 16:05 |只看该作者
乙醇75%试一试   PBS加2倍培养基中抗生素浓度  纱布不用  我一般是剪刀和镊子直接上 冲洗出来骨髓后 无菌筛 ...+ ?  Q6 J1 X/ v
franklinhg 发表于 2010-7-21 15:21

2 V) x8 f/ T) [& j( Z& P% Y. c! F. e
8 y4 P" ?  x# c* C! h) c' V- P
    谢谢你的建议6 ?) Z, `4 U) O8 S- P% @) y4 g
   我下次试一试。我估计可能和纱布撕扯有关,即使纱布消毒了。

Rank: 1

积分
10 
威望
10  
包包
57  
10
发表于 2010-7-21 16:06 |只看该作者
现在市面上的培养基假货很多$ E. U5 z/ ]7 |# M
franklinhg 发表于 2010-7-21 15:22

0 G% Q0 p, Q" e4 Q, D3 m8 s9 O0 L  d6 r- S1 Z- ~$ `" A" o- l
# p/ K+ h( X/ d
    我们经常通过这公司买,已经建立了很好的关系了,这个可以排除,呵呵。
‹ 上一主题|下一主题
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2025-6-16 21:16

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.