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MSC污染 [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2010-7-21 14:37 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
先谢谢各位同学了,我的情况是这样的,自从6月份以来,每次取MSC的时候都会在不同的时间段出现细胞污染,有的是在原代就出现,有的是长到第一代,或者第二代,小弟非常困惑,希望能得到各位的指点。
; Q+ j* ^: c- A6 y* u我取的过程大概是这样的。
$ i& ?7 ?  d- T1 SD大鼠3-4周处死,用乙醇(100%)的浸泡5-10分钟,然后拿到超净台去两个大腿,去皮,用PBS洗十遍,然后用纱布把肉撕掉,再用PBS洗10遍,然后取细胞,我一般取骨垢端以及大腿的骨髓,取完以后放入离心管,800转,8分钟,然后用培养液吹起来,放入六孔板中,一般一个大腿一个六孔板,然后72小时或者96小时以后换液,传代。
( P1 t" I" t$ G- u' j我所用的培养液是高糖DMEM,血清是GIBCO的,浓度是10%,加双抗。
( e6 O* P( u/ F8 \请大家看看哪里出现问题了。
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沙发
发表于 2010-7-21 15:20 |只看该作者
个人认为可将换液时间缩短一些,因为双抗只是抑制细菌的,时间长的话有些细菌就会产生抗药性,那就麻烦了。另外,建议原代的时候提高双抗的浓度。
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藤椅
发表于 2010-7-21 15:21 |只看该作者
乙醇75%试一试   PBS加2倍培养基中抗生素浓度  纱布不用  我一般是剪刀和镊子直接上 冲洗出来骨髓后 无菌筛网200目过滤后  离心1000g3分钟 25度  然后重悬 接种一般一只大鼠我接种一个T75 5-7天长的很好
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板凳
发表于 2010-7-21 15:22 |只看该作者
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培养基在加入10%血清和抗生素后 再次过滤 试一试

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报纸
发表于 2010-7-21 15:22 |只看该作者
现在市面上的培养基假货很多

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地板
发表于 2010-7-21 15:25 |只看该作者
要说明一下出现的污染是什么污染,细胞污染可能是多方面的原因造成的,如人员操作、环境是否无菌、分离培养用具是否无菌以及培养基是否无菌等,而且污染也包括多种污染,如微生物、细菌、真菌、支原体、病毒等,有些是认为操作才能造成的,有些是血清等带有的,所以,最好说详细一点,最好附图。
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发表于 2010-7-21 15:29 |只看该作者
额,过程木有问题。应该与楼主操作或者培养箱有关吧。
0 _# n1 _3 Y: ~7 S! T; ^另外,为什么楼主用的是高糖的DMEM,高糖不是会导致MSC分化吗
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发表于 2010-7-21 16:04 |只看该作者
个人认为可将换液时间缩短一些,因为双抗只是抑制细菌的,时间长的话有些细菌就会产生抗药性,那就麻烦了。 ...
2 l9 T8 ^) _+ i  x" iguosapphire 发表于 2010-7-21 15:20
6 D( R4 d  X$ Y- \- \, O
3 Y+ L- l! x/ T2 D( G1 f
谢谢你的建议* _0 j' H  L2 R& I1 p1 |" ?
    如果换液的时间短了,细胞一般72小时以内细胞感觉帖不上

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发表于 2010-7-21 16:05 |只看该作者
乙醇75%试一试   PBS加2倍培养基中抗生素浓度  纱布不用  我一般是剪刀和镊子直接上 冲洗出来骨髓后 无菌筛 ...
2 l5 t" ?* A; H4 z1 B7 |. rfranklinhg 发表于 2010-7-21 15:21

4 c$ ]# V% x; k0 X* T
- j$ Q+ c/ ?# D8 X7 |  F5 ~8 h+ \% T2 |! F, n% J# ^5 I6 K
    谢谢你的建议
7 ?, H7 H# f$ i! H: F. k- c   我下次试一试。我估计可能和纱布撕扯有关,即使纱布消毒了。

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发表于 2010-7-21 16:06 |只看该作者
现在市面上的培养基假货很多
2 Z8 [5 U3 H0 b/ F" X4 Wfranklinhg 发表于 2010-7-21 15:22
6 W! ]! ]1 I2 _, R1 j0 z
$ g' f$ C- _% m. w% }
- c$ x7 W4 T8 u5 C, x. _' p3 k+ z
    我们经常通过这公司买,已经建立了很好的关系了,这个可以排除,呵呵。
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