结直肠癌干细胞培养

hanbiao1982

希望养过结直肠癌原代干细胞的朋友分享下培养细节哈！比如培养基配制、细胞球形态等

细胞海洋

先说说你的吧

dwc326

我们有做过结肠癌CD133+和CD44+细胞的分选实验，还没有做过培养，只是分选后提取RNA检测某些基因的表达变化情况。

hanbiao1982

回复 1# hanbiao1982 & o+ [2 w8 x$ N( O

/ r: ^1 t' p! P% H" [6 w9 m# J% h/ Q4 `
, y) F, N, h) R4 z+ W    我现在做结直肠癌细胞球培养，一个月过去了，原来似球的东西现在基本都消失了，不知原因何在？希望培养过的兄弟们给一个实用的protocol，谢谢

胡问成

回复 1# hanbiao1982 ; ^# ]" X$ V+ l* X) G1 z
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    癌组织原代不好分，直肠结肠癌由于存在细菌，有菌就更不好分，结肠癌干细胞一般用标磁珠的CD44 ，CD133进行磁珠分选，将分选阳性细胞做培养，培养基1640就行吧，血清用好一点的Gbico的。分后2-3天换液（有些贴的），等长起来后用CD133直标荧光抗体流式检测纯度。3 a. Y0 ^) k# P4 a
忠告：直肠癌分原代培养时一定严格无菌操作，取回的癌标本先在20乘的双抗中泡几个小时，再多洗一下。 PBS洗细胞是加一点点血清，防止细胞长期饥饿影响活性。祝你顺利

along0312

培养基一般使用无血清DMEM，添加EGF、bFGF等细胞因子。可以用培养基直接筛选，普通肿瘤细胞会慢慢死亡，活下来的成球细胞就是干细胞球。

hanbiao1982

我是按照2007年nature上的那篇培养的，但没有培养出来，细胞没有污染，但状态越来越差，后来就慢慢死去。有师兄做胃癌的都已经做出来了，但更成熟的结直肠癌我却没有做出来，不知何故。所以希望哪位做过结直肠癌干细胞培养的给个实用的protocol。

hanbiao1982

我是按照2007年nature上的那篇培养的，但没有培养出来，细胞没有污染，但状态越来越差，后来就慢慢死去。有师兄做胃癌的都已经做出来了，但更成熟的结直肠癌我却没有做出来，不知何故。所以希望哪位做过结直肠癌干细胞培养的给个实用的protocol。

hanbiao1982

又看了一些文献，感觉他们所用的培养条件都不一样。有的加了BSA、腐胺、肝素、孕酮，有的却没加，都说能培养出肿瘤球，但他们所发的图我怎么看都有点不太标准哈。就像是多个细胞单纯的聚积在一起的感觉。protocol啊？哪位仁兄发发吧！