在做细胞免疫荧光的时候为什么细胞在透膜之前就都掉了

taoqilh

我在做小肠上皮细胞的免疫荧光的时候，用4%多聚甲醛固定30分钟后透膜，可是再透膜之前细胞就全掉了，请问问题是出在哪呢，我在操作过程中很小心，液体都是沿着壁打进去的，为什么细胞还掉呢？

wang1234611

你的细胞是在自己养的吗，如果是的话你还需要处理的载玻片的，用多聚赖氨酸和层粘连蛋白处理，我也是做细胞免疫荧光双染的，最好观察细胞还是挺多的! W2 k) Q+ h: g5 E8 t

lxm5668

我做的时候间断的出现过两次这种情况，莫名其妙，4%多聚甲醛是以前用过的，第一步实验就over 了，很恼火。! T: O( }1 U, y2 i7 T) D
处理的方法：重新配制4%多聚甲醛，再做就没问题了。当时一度怀疑有人对我的试剂下手. k6 Z  N. A  S: b+ O
我考虑两种可能，一是4%多聚甲醛的问题；二是细胞状态的问题。