hESC复苏后传代方法

bigsnow55

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: v0 N% T- j. B- ?"克隆泡在DF12里再往下刮"，需要先切割再刮吗? 另外，我看到不少人是用胶原酶处理25min或更长，您为什么可以只处理3-5min呢？谢谢指点！

song58

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8 f' M2 m! v4 s6 t+ n7 c  A7 f7 X* y% W- I
这个可能是个人习惯不一样吧...
% u: Z0 b6 {% M) u$ Z我一般胶原酶处理一会儿，看到克隆卷边了就吸走，然后用移液管刮克隆0 o' d- I4 J/ j0 s/ l1 e

ruofan1982

回复 bigsnow55 的帖子3 \+ Q& j5 h7 ^3 f2 t, |1 s- v
0 X/ S9 i, y+ x8 P" z
细胞已经消化脱落了，我们用胰岛素针头在镜下机械性切割哦，当然，这只是在克隆少的情况下。克隆要是很多的话，我们选择用吹的办法

bigsnow55

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8 f! b5 b! P0 W8 X: Z4 Y5 s  y4 h" O% y+ d4 l( X3 i
谢谢！请问你们的胰岛素针头从哪家公司买的，价格贵吗？

微笑ci

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9 y- A% [! b; ]
) R- T" H# l1 _$ i) N用移液管刮的话，克隆会保持完整吗？刮下来后也是要吹的吗？请问怎么吹？我总是吹的大小不均~谢谢！

song58

回复 微笑ci 的帖子/ a5 ^# Q* a0 f  x; A* J
9 F6 u) p) l) U+ G0 D" l
传代细胞就是要把大的克隆变成小的啊，所以用移液管刮就是把大克隆刮成小克隆。然后用1ml的枪吹吸几次，不要太猛烈了就行。吹吸后克隆大小不一太正常了，没事：）

dongxin

回复 farmer 的帖子; }; O1 U3 H5 `  N" D$ U  s
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1. 一般hESC 用胶原酶Ⅳ消化，5-10分钟，依镜检结果来定消化时间；
9 Z( V; Q1 `9 M$ y1 g8 N2. 至于分化细胞的分离，建议：若hESC中分化的细胞少，可通过挑传的方法除去分化细胞；若是分化的细胞多则通过挑传的方式将未分化的转移到新的培养基中！供参考，祝好运！

微笑ci

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7 q2 ?9 O4 \: h4 N' [+ p( I; U, e# l6 B% W/ [7 u; T2 \
谢谢回复，我还有点疑问~我也是用1ml的枪吹，吹的大小不均，这样长到传代的时候觉得大的好大，小的又比较小，没有问题吗？另外请问你们胶原酶的浓度是多少？我们消的时间比20分钟长好多呢

song58

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7 v, m9 H  M4 }: l' |回复 微笑ci 的帖子
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我一般就消化3～5分钟，镜下看到克隆卷边就洗掉胶原酶，开始刮2 U) o( K% ~- [) E# j

2 [8 n. S; g9 D大小不一的情况，开始做的时候都会出现，我觉得影响不大。刮的时候可以有意识的把克隆刮的大小差不多，熟练了就好了嘿嘿

微笑ci

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谢谢！我这两天又发现了个问题，还要请教你，  我的克隆有的从周边分化了，还比较严重~细胞很大，不圆，请问是什么原因呢?是不是我传代的时候吹的太小了？我就刚传了4天~有什么解决办法吗？谢谢！