hESC复苏后传代方法

song58

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/ G% K: s9 Y6 y6 n! Y# N克隆周边分化的话，一般我会有两个处理办法：0 a; [8 d9 l- \2 @: Q
1、把分化严重的克隆在镜下标记后，用枪头或玻璃针挑掉；; y' O9 Y& |9 j, k2 X, w- L: |0 U4 w0 N+ o
2、把分化的部分挑掉。这个办法比较考验手法和经验，我们实验室普遍的说，女同学做的比男同学更好...4 G) t# r7 Q" T# ^& l! h9 x8 O
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"细胞很大，不圆"这个命题我想象不出来，要是有图片可以看看没准能和你一起讨论下：）3 T! y" Z0 ~5 p' z1 T& X
hES尽量不要吹的太碎，而且feeder状态要好。
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希望对你有帮助

微笑ci

回复 song58 的帖子% L. Q, O2 Y8 @2 c
; Y% x6 a3 U* |# E6 m
图片本来挺大的，也不知坛子里有没有限制就压缩了下，照相技术也较差，前辈凑合看一下吧，呵呵，

song58

回复 微笑ci 的帖子* ^" D" B1 ?8 ^: U* ]! ^) t1 B

5 z- l7 {+ w* y; @( E" v& k+ @: S前辈不敢当，互相学习，共同进步！
) \" S2 q; |6 G& N8 b
0 R* y1 j/ @( d: [# W+ m5 r刻薄一点的说，这样的克隆还是扔了吧...; i  k* [7 ]# j. N$ b
% j9 k  c4 a- o* f9 s: D) ~
要是这细胞很重要，或者你想练练手，就把中间那块挑出来吧。

wangyimei

用IV胶原酶进行消化的过程中，其会进行选择性的消化，在30min左右的时间，将状态好的未分化的克隆消化下来，而未分化的克隆仍贴在壁上，通过此种方法即可将分化与未分化的细胞区分出来。

sino85196488

hESc的传代还是用酶比较好，胶原酶，水解酶都可以的，虽然很多人说用机械法，但是本人尝试过，很难控制的

hesu1105

回复 ruofan1982 的帖子* j# {4 s1 ^8 |+ |) V2 x/ s% P9 O

. d  W+ c: u, P7 ~2 R就是用移液器吸液体吹打吧，先用E酶消化3 min 后，摇晃平皿，在镜下观察大部分细胞消化成功后，就可加培养基中止消化，并吸液吹打后培养啊。不过新从冻存管复苏的细胞是要多培养的。