求助：小鼠体外受精

chiangmax

回复 9# exin11 . f4 V3 v$ F& n1 m6 o# R  q2 E: @
我不向你求助，常规IVF没有你的透明质酸酶处理，除非非常难做的IVF

chiangmax

回复  chiangmax & ]2 d- e+ I. ~  C* b4 {5 V$ p

$ U/ P, M% p2 N/ \3 _: d4 s$ [
, g! m$ ^8 ~4 S( ^* J    请不要轻易否定别人的观点，除非有确切的证据来推翻。既然是来求助，那请你虚心 ...8 Z# C, j, ]; j' u1 v: {, i
exin11 发表于 2010-9-12 21:09

  x$ G% C' X1 z4 N4 A. B, n/ J3 G
5 P( f$ j; x9 \; ~. m# h/ ]3 W% T既然你认为你的透明质酸处理非常正确，请拿出有力的文献证据，经验这个东西不是随便说说而已。另外，我也没向你求助

chiangmax

' l+ L+ T1 v# q: ?9 |9 R' M# R

可是我不知道为什么我的小鼠受精率很低，有时候四十几个卵只有一两个受精的。
4 e, j, E% w3 V/ T# j+ E7 ?1.请问HTF也是自己配制的吗 ...
  B! G  k0 i9 _8 Mxmliuj 发表于 2010-9-12 21:02

* w' ]! V0 q6 w$ I% ]& e( q, i$ V% u+ T  T0 @1 q
  B# A7 F( [7 @% ^  G/ p
一、HTF可以配置，也可以用其他液体代替， 比如MEM alpha' C% `$ z7 |- J- _4 j2 o4 M7 G, G
二、预温当然要盖油
9 {" S  ^- b* [8 o9 _; ^三、你的取卵时间很不错
! u8 C9 z6 m  v四、受精密度高一点没有太严重后后果
9 a: d$ T& ~) n' t+ [, Z* }五、鲜精受精率一半要大于80%（论坛里有个牛人可以做到95%）( S- Z, d# C& |# p, d; [' X$ w
我的技术完全来源于JAX实验室，如需要可发私人信息

exin11

回复 10# xmliuj # B; V" K& }3 V, E
3 q) A# g: [; F' L" ^( t
没太多时间，先简短写下，希望有帮助！/ M+ J% G+ c0 W$ f7 I9 w
1、现在我是买sigma的HTF（主要为了方便），以前是自己配，PH很重要，但渗透压以前没测过，两者之间还是sigma能好一些，也考虑过是渗透压的问题；" s6 H& z* R$ g$ @4 J0 Q
2、HTF的平衡，我是做成100微升的滴，覆上矿物油（sigma），不覆，PH会变，渗透压也会变；: @3 K" x& @* \/ m. U' `$ x
3、取精时我只是把附睾尾和下面的输精管剪下，然后用精细镊子撕几个口，用平口镊子挤出精子，然后放在滴中撕开；我是让它获能1h，也有获能10min的，那是用MEM+BSA液；& T# ~5 r) A" W2 {. R9 C5 r9 [# a
4、先放复合体，再放精子，精子具有向异物性，以卵子为目标，这样也是对精子有一定的筛选作用；
% j$ n) e  A1 I& v. z7 u6 z5、这一步，我是将卵子从膨大部获取后，用透明质酸酶处理片刻（绝对不能时间过长！！），然后放入洗滴（洗盘也是过夜），洗去残留的酶、组织等（避免异物对受精的影响），然后才转入受精盘，进行受精，所以温度变化不大，不需要预热；
, R6 |, f- ?6 s1 K3 G7 e6、镜子过高不好！首先是4-6h后，你洗卵时会比较麻烦，再者，精子密度过高，会影响受精效果，有关这方面影响的文章很多，不说了；1 U* ^5 _& c( T2 E$ j
7、最好是这段时间，因为超排激素的原因，卵的时期等；/ t5 [4 p; J; ?$ S2 ^% |  ^
8、我做的基本上是95%左右！

exin11

回复 11# chiangmax
/ j1 y" B" [& V1 |/ w/ h
) v$ e( p' I$ U, s6 F( y1 s
) G/ i( K0 ]0 C    那请问你是做牛、羊、猪等大型动物，还是兔子、大鼠、小鼠的，请问你做过小鼠的IVF吗？ 我在做，所以我按我的做法、观点发表一下浅见，想能帮助这位求助的。

exin11

回复 12# chiangmax 7 K8 q3 y( g4 m: e% U7 P0 N' ?
; @" L. W; {( H- \, R% L* M
6 p) V& d  |$ G! q8 I
    我说的当然是经验之谈，文献上的你验证过吗？我的方法我知道效率怎么样，95%！ 我也知道很多方法，像MEM+BSA、HTF、M2、M16等，我都试过，这个是最好的，所以我告诉他这种，不对吗？

chiangmax

回复  chiangmax
5 P* b" F7 Y- _) f. m+ l; X7 l# N. C, F- p

& N0 f3 M0 ~* A$ N2 N    那请问你是做牛、羊、猪等大型动物，还是兔子、大鼠、小鼠的，请问你做过小鼠的 ...* c# b$ z, e  P$ H$ I. ?
exin11 发表于 2010-9-12 21:47

& {* o4 ^0 A6 \+ m/ C
+ D5 B: r8 J4 s& y# Q不好意思，我说的可能有点过，不过我的是JAX实验室方法。小鼠和人的IVF只做过10年。

exin11

回复 7# xmliuj
" n2 ^1 g3 p& o$ v2 N  V  q+ e* Z; d3 q

( Y3 G% ~3 ~) l! w    我说的当然是经验之谈，我也知道很多方法，像MEM+BSA、HTF、M2、M16等，我都试过，这个是最好的，所以我跟你说这个。

chiangmax

回复  chiangmax
9 _/ k: k2 h( g' i& O$ W3 f; {" @. ~  X

" h1 U) f  ?  B% L+ [  i    我说的当然是经验之谈，文献上的你验证过吗？我的方法我知道效率怎么样，95%！  ...
5 l" d1 z: V" L3 B9 a* ?exin11 发表于 2010-9-12 21:51

8 H; u1 M, v6 e2 x, d" T( j. F5 a; p% N
M2可以做IVF吗？

exin11

回复 17# chiangmax   j6 ^8 S& I$ O
. m0 O( [2 D0 t0 h7 Z8 V  \7 V
. m- i3 r/ D  ]/ Y
    那也可以写一下交流一下嘛，给他提供思路，让他自己选择。