求助：小鼠体外受精

chiangmax

回复 9# exin11
: [2 E( ?4 @0 a- G# K. _我不向你求助，常规IVF没有你的透明质酸酶处理，除非非常难做的IVF

chiangmax

回复  chiangmax
# S9 K* U/ A: M+ N6 G
: x0 ~# m7 |2 l$ u. F+ `. u1 @' u; T
' R( X: {9 W* ~0 y3 s1 @    请不要轻易否定别人的观点，除非有确切的证据来推翻。既然是来求助，那请你虚心 ...
& K3 X  ]; a( X0 e9 h2 Nexin11 发表于 2010-9-12 21:09

# A1 z/ r9 u( O# W1 `, p& P  _( @$ R
3 s- p. G9 w7 Z6 ?$ M
既然你认为你的透明质酸处理非常正确，请拿出有力的文献证据，经验这个东西不是随便说说而已。另外，我也没向你求助

chiangmax

2 C$ M2 ^8 V/ f7 ]

可是我不知道为什么我的小鼠受精率很低，有时候四十几个卵只有一两个受精的。
, m/ _: E: v3 \1 X1 f# F* A3 V: @1.请问HTF也是自己配制的吗 ...$ ~9 }. C1 ~0 E. F  c8 Q8 I1 u
xmliuj 发表于 2010-9-12 21:02

6 s- _2 ?5 y9 j
2 @5 A6 G8 q) I9 R( n% x+ [
" u4 o; s, u1 E, K
一、HTF可以配置，也可以用其他液体代替， 比如MEM alpha
  o1 d& W( g1 w5 o. r$ _: O二、预温当然要盖油( E& A5 E+ f- [5 _
三、你的取卵时间很不错
" G! b$ k8 U% {7 j2 L9 U! Y+ G5 J' e四、受精密度高一点没有太严重后后果
; g; n7 f7 g) G7 b8 b* r五、鲜精受精率一半要大于80%（论坛里有个牛人可以做到95%）
9 k$ c9 `& b5 H" `$ R  }8 K  m我的技术完全来源于JAX实验室，如需要可发私人信息

exin11

回复 10# xmliuj - S5 p, H/ I8 f9 L. x7 A3 G

+ N1 s6 Z6 |; [" g没太多时间，先简短写下，希望有帮助！& E5 m& S8 Y6 D( b: D) N
1、现在我是买sigma的HTF（主要为了方便），以前是自己配，PH很重要，但渗透压以前没测过，两者之间还是sigma能好一些，也考虑过是渗透压的问题；
' Y& t$ f. H, D% {. w1 L6 T2、HTF的平衡，我是做成100微升的滴，覆上矿物油（sigma），不覆，PH会变，渗透压也会变；
2 M/ G0 p9 x2 `& ~3、取精时我只是把附睾尾和下面的输精管剪下，然后用精细镊子撕几个口，用平口镊子挤出精子，然后放在滴中撕开；我是让它获能1h，也有获能10min的，那是用MEM+BSA液；
0 u/ _4 e% L4 E2 C4 Y3 t# n" w6 F4、先放复合体，再放精子，精子具有向异物性，以卵子为目标，这样也是对精子有一定的筛选作用；% v/ ^% w( A7 V0 z; ]
5、这一步，我是将卵子从膨大部获取后，用透明质酸酶处理片刻（绝对不能时间过长！！），然后放入洗滴（洗盘也是过夜），洗去残留的酶、组织等（避免异物对受精的影响），然后才转入受精盘，进行受精，所以温度变化不大，不需要预热；
* m; [; ?4 M" a. E2 ^6、镜子过高不好！首先是4-6h后，你洗卵时会比较麻烦，再者，精子密度过高，会影响受精效果，有关这方面影响的文章很多，不说了；
+ B# r# w/ D1 p: `7、最好是这段时间，因为超排激素的原因，卵的时期等；* ]( `# K  f$ C% ]# S! G
8、我做的基本上是95%左右！

exin11

回复 11# chiangmax
3 ~& @/ [9 [4 Z# Y$ [" c# f) ?
9 a- k( j& m8 C& [/ K9 l, c* l! i  z  f' U: c, `" v
    那请问你是做牛、羊、猪等大型动物，还是兔子、大鼠、小鼠的，请问你做过小鼠的IVF吗？ 我在做，所以我按我的做法、观点发表一下浅见，想能帮助这位求助的。

exin11

回复 12# chiangmax
7 {2 ~# M; Y- w4 T' [6 p7 O
+ _4 t+ C6 i9 A& q8 a
, Q" W' N1 a% ^2 T! K  I    我说的当然是经验之谈，文献上的你验证过吗？我的方法我知道效率怎么样，95%！ 我也知道很多方法，像MEM+BSA、HTF、M2、M16等，我都试过，这个是最好的，所以我告诉他这种，不对吗？

chiangmax

回复  chiangmax # [. Q- x$ D( Q2 s5 J
7 O; k+ t* `# K' c
  k+ _  g3 Z5 Y/ K. o6 ]: W
    那请问你是做牛、羊、猪等大型动物，还是兔子、大鼠、小鼠的，请问你做过小鼠的 ...1 x" T3 v# [+ h1 m1 [/ Q% N* \
exin11 发表于 2010-9-12 21:47

$ X' ?4 G, w/ r& d

% z  P" t/ x; I8 L7 R& D" |2 u/ U( b不好意思，我说的可能有点过，不过我的是JAX实验室方法。小鼠和人的IVF只做过10年。

exin11

回复 7# xmliuj ! Q/ u0 z  Q3 t* I3 W" ?5 _, H

! A2 X; y9 ~& R2 b8 `
# N1 }( }! s. F0 @    我说的当然是经验之谈，我也知道很多方法，像MEM+BSA、HTF、M2、M16等，我都试过，这个是最好的，所以我跟你说这个。

chiangmax

回复  chiangmax * o; g1 M$ ^; A$ _3 a# j; v9 C
( q" `5 c& F5 C$ q
0 F$ }6 k4 u. Z' u
    我说的当然是经验之谈，文献上的你验证过吗？我的方法我知道效率怎么样，95%！  ...
( n' D% C9 b! z. J* oexin11 发表于 2010-9-12 21:51

; t' }/ g* R! y
# f- t4 o/ q! J1 \1 VM2可以做IVF吗？

exin11

回复 17# chiangmax
4 a5 n9 b8 z; k- N8 |; C3 v9 ]
& Y1 h$ l- U' u' I/ f
  |1 Z) G9 h8 R) o( [6 y% r    那也可以写一下交流一下嘛，给他提供思路，让他自己选择。