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作者：周芳作者单位：200433上海，第二军医大学附属长海医院血液科
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【摘要】 目的 分析CD34 纯化自体造血干细胞移植治疗恶性血液病的临床疗效。方法 11例病人进行了CD34 纯化自体造血干细胞移植,8例患者进行了未分选的自体造血干细胞移植,动员方案为CTX Vp16联合GCSF。CD34 细胞分选采用CliniMACS系统。结果 分选后CD34 细胞纯度达到(88.99±6.88)%，回收率达到(69.06±17.07)%。11例分选患者感染率为（5/11例），复发率为(1/11例),死亡率为(3/11例)。外周血中性粒细胞＞0.5×109/L时间为(11±1)天,血小板＞20×109/L为(13±3)天，8例未行CD34 分选患者的感染率(4/8例)，复发率为(3/8例),死亡率为（5/8例）。外周血中性粒细胞＞0.5×109/L时间（11±1）天和血小板＞20×109/L（14±4）天。结论 利用CliniMACs系统体外进行外周血CD34 细胞的富集与纯化纯度、回收率均满意，自体移植后造血功能重建顺利；与对照相比造血重建时间、感染率无显著差别，近期疗效满意。 1 r* T& L5 \$ S
【关键词】CD34 ;分选 干细胞移植 体! c: D, g7 F- P0 v
由于异体造血干细胞来源的限制，自体造血干细胞移植在治疗恶性血液病中应用较为广泛。但自体移植物中往往混有肿瘤细胞，是移植原发病复发的重要原因。因此，自体移植时进行造血干细胞纯化是目前一项较为有意义的临床课题。我们分析了1999年至2002年我科进行的11例CD34 纯化自体造血干细胞移植病例的疗效，并以同期进行的8例未行CD34 分选的自体造血干细胞移植病例作为对照，对造血重建、并发感染、移植后复发率等进行初步评价。' t8 r* j; y# Y
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1对象和方法+ C) N b: h- |3 ^* G% Y2 m
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1.1病例11名纯化的自体CD34 造血干细胞移植，男10例，女1例，年龄（39.36±15.7）岁（14～64）岁。其中NHL（Ⅳ期）8例，多发性骨髓瘤（Ⅲ期）2例，浆细胞白血病1例;8例患者进行未经纯化的自体CD34 造血干细胞移植，男7名,女5名,年龄(36.63±16.33)(15～57)岁。其中NHL（Ⅳ期）5例,ALL1例,AML2例。
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1.2自体外周血造血干细胞动员及采集动员方案为化疗联合GCSF，CTX 25mg/(kg·d)，d1～2；Vp16 5mg/(kg·d)，d1～2；在化疗后白细胞从最低点开始回升时应用GCSF（5μg/(kg·d),3～6d）。白细胞＞3.0109/L时开始采集。采用COBE血细胞分离机进行外周血单个核细胞采集，循环血量为每次12 000毫升。
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1 P. k: j6 \5 [; Y3 t; c& e1.3CD34 细胞纯化CD34 细胞分选采用CliniMACS系统，（德国AM Cell公司生产）。采集的自体单个核细胞经稀释后与CliniMACSCD34单抗试剂在19℃～25℃下共孵育30min; 缓冲液洗涤2遍后，进行CD34 细胞分选。流式细胞仪检测移植物分离前后CD34 细胞比例，计算CD34 细胞回收率，台盼蓝染色拒染率计数活细胞。程序降温仪冷冻，-196℃液氮冻存。
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% Z0 Y. C" b, w& w0 Q7 X5 t0 e+ l1.4移植方法患者入住层流病房, 常规肠道消毒剂预防感染。0天回输CD34 细胞。移植过程中根据血象给予GCSF、少浆血、单采血小板等支持治疗。以外周血中性粒细胞＞0.5109/L,血小板＞20109/L为造血功能重建指标。- H. X* b* O, \4 e5 t! v5 C. F
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1.5统计学方法 @8 N8 o2 v& }" [! Y
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CD34 细胞回收率=纯化后MNC数CD34 百分率纯化前MNC数CD34 百分率100%
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数据统计结果以±s表示,采用t检验。
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2结果
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2.1CD34 分选结果
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# V" ~1 }$ p$ O( {11例患者均进行2次采集，对分选前后采集的单个核细胞数及CD34 细胞百分数（纯度）、回收率、实际输入的CD34 细胞数进行统计分析。结果表明， 11例患者进行造血干细胞纯化后CD34 细胞纯度达到(88.99±6.88)%，回收率达到(69.06±17.07)%。11例患者实际输入的CD34 细胞数达到(3.56±1.77)106/kg。
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, @% q5 |/ z8 J% ^' b9 E' T2.2临床疗效观察+ i( Z* {) h2 \2 k5 H+ j
1 X% Z8 L `( \+ o2 C" H; E11例分选患者移植后临床观察资料如表1。两组观察指标进行统计分析结果如表2。表1CD34 分选病例临床观察表2两组对照观察 ※两组比较无显著性差异P＞0.05;☆两组比较有显著性差异P＜0.01; @/ Z, i& C2 d. X
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3讨论* N" W8 J, c. ?1 B M- q
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自体造血干细胞移植是目前治疗恶性血液病，尤其是淋巴瘤、多发性骨髓瘤的重要手段。如果移植物中混有肿瘤细胞，必然会导致肿瘤复发,因此,体外净化去除移植物中可能存在的残留肿瘤细胞，对自体移植后复发率的降低，具有重大意义。在恶性血液病中除了白血病，淋巴瘤、多发性骨髓瘤等其他恶性血液病的肿瘤细胞均不表达CD34抗原，因此通过CD34 选择可间接地去除移植物肿瘤细胞，达到净化目的，从而减少移植后肿瘤复发［1］。2 c8 P/ U$ t. K! ^
$ s! r5 I; S" P5 D3 J$ ?免疫磁珠分选技术（MACs）在移植物体外净化的研究领域中处于领先位置。Despres等报道利用CliniMACs系统进行外周血CD34 细胞的富集与纯化,自体移植后造血重建功能较好,细胞数低至0.5106/kg仍可达到造血重建［2］。本研究中，11例通过免疫磁珠进行CD34 细胞分选的移植患者均顺利达到造血重建，最低细胞数为1.15106/kg。11例患者纯化后CD34 细胞纯度平均达到(88.99±6.88)%，CD34 细胞的回收率达到(69.06±17.07)%，实际输入的有效CD34 细胞数达到(3.56±1.77)106/kg，与国外文献报道的分选CD34 细胞的纯度（89.4%～99.8%）、回收率（46.5%～87.3%）相近［3］，造血重建顺利。在移植后的临床观察过程中，11例分选患者与8例未分选患者造血重建时间无显著差别(P＞0.05)。据文献报道，自体移植物CD34 细胞数，不仅与移植后近期内的造血功能重建有关，而且与移植患者的远期造血重建密切相关，近期中性粒细胞的恢复时间，为远期造血重建的重要预后因素［4］。由于目前我们分选后移植的患者随访时间较短，尚不能对远期造血重建情况作出可靠评价，但11例患者无一例出现排斥，提示长期造血重建功能满意。0 p, e" S+ z: F( d5 M5 x2 R
4 `+ p* i( n2 [6 E11例分选患者中有5例合并感染，感染率为（5/11例），与8例未分选患者的感染率(4/8例)相比亦无显著差异，文献报道亦没有发现因为T 淋巴细胞的去除、免疫重建的延迟而导致感染率明显升高［5］。在11例分选患者中，1例患者移植后5个月血小板未恢复正常并发脑出血死亡，1例患者移植后1年死于胃癌，仅1例患者在移植后2年3个月复发死亡，复发率为(1/11例),死亡率为(3/11例)。8例未分选患者中，1例移植失败并发肝昏迷死亡，4例移植后复发死亡（其中2例为AML）复发率为(3/8例),死亡率为（5/8例），近期疗效满意。, N4 _4 a8 ] E& }, K" H/ X" `- ^- m
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我们的结果提示，利用CliniMACs系统体外进行外周血CD34 细胞的富集与纯化纯度、回收率均满意，自体移植后造血功能重建顺利；与对照相比造血重建时间、感染率无显著差别，近期疗效满意。但由于观察例数及对照病例数较少，且病种有所不同，随访时间又较短，对复发率与长期生存率进行客观评价有待于进一步扩大临床病例及远期随访。
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