为什么原代的骨髓MSC一传代就死了？

zhanglei1414

如题，请知道的朋友解答一下，因为消化时间太长了，还是胰酶没有终止掉？4 t9 ?* U, J1 o* L
7 B* H0 E* [# ~* T# B4 L: [
差速贴壁具体怎么操作？有人知道没？

illidancui

同问, \3 a5 m5 f9 w% Q( p; \" x
一传代状态就不好

mhy1982

原因很多啊！细胞本身状态就不好；传代过程中胰酶对细胞的损伤都有可能

supergama

原代培养的何种MSC？小鼠、大鼠、人？情况稍有不同，大鼠的最好养，人的次之，小鼠的MSC有些麻烦，有时贴壁后不容易消化，如果担心胰酶的损伤可以换用Tryple试试，这个酶比较温和。

qiongyacc

骨髓间充质干细胞原代培养可以不用胰酶啊 ，全血培养或者用pecoll分离，你怎么会用到胰酶呢？告之以便学习！

zhanglei1414

骨髓间充质干细胞原代培养可以不用胰酶啊 ，全血培养或者用pecoll分离，你怎么会用到胰酶呢？告之以便学习！ ...+ j: s' t5 }$ V) m
qiongyacc 发表于 2010-9-27 09:34

* j% @# Z' o1 w8 M
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9 B$ J) @* X( @. j    原代养好了传第一代的时候不用胰酶吗？我养的人的骨髓间充质干细胞，原代传第一代的时候就挂了，不知道什么问题！！

zhanglei1414

原代培养的何种MSC？小鼠、大鼠、人？情况稍有不同，大鼠的最好养，人的次之，小鼠的MSC有些麻烦，有时贴壁 ...
0 y/ E2 y) t: G; Ksupergama 发表于 2010-9-27 08:44

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; n, e% w  @: n3 {7 c8 M    Tryple是什么东西？麻烦赐教一下了，我用胰酶（没有EDTA）消化原代的MSC，很好消化，但是吹下来接到新瓶里就不行了，没几个贴壁的，不知道怎么回事，郁闷啊！！

supergama

Tryple Express， Gibco的产品胰酶的替代品，另外millipore的accutase应该也可以。

qiongyacc

回复 6# zhanglei1414
' m  R7 Q+ @7 N- }
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1 ~2 m" G# z. G' [' i5 K3 e   呵呵 我养的是大鼠的 不好意思啊！

hawkyiger

同样有这个问题。但是也感觉有些细胞特异性，有的细胞耐受性强些，传代后照样疯长；而有的则传代后只有少数贴壁，然后就挂了。' C" ^$ O+ h+ p3 ]+ f0 ?
能做的只能是尽量减少消化时间，吹打及分装细胞时动作轻柔，同时尽量加大传代密度了。