正常滑膜细胞原代培养（转）

细胞海洋

实验材料：
+ Z$ D' k  a" I- }, l% P3 V& E3 C1 w1. 实验动物：大鼠、兔，人手术切除的关节等；4 z+ X' O3 c8 T/ U
2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2；& I( c$ J$ Y. \6 v
3. 培养液：RPMI1640培养基，补加15%小牛血清；
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实验方法：+ d& f" R. N+ K- Q. [& Q. ?
1. 将大鼠处死后，用75%酒精消毒；
* X% A( d) i: c: v2. 用手术剪剖开其四肢皮肤与肌肉，暴露长骨两端的关节，取出关节面滑膜组织置于盛有缓冲液的培养皿中；
, [. g8 b7 ^% E& P3. 剔除滑膜组织外层结构及周边软骨组织，用缓冲液洗2—3次；
; L8 c  ]/ s% o9 U& ~5 S- y4. 将滑膜组织置于盛有少量小牛血清的培养皿中，剪碎成1mm×1mm×1mm大小的植块；" ]' e3 u$ X; a
5. 将制备的植块接种到螺旋口培养瓶中。反转培养瓶，使植有组织块的一面朝上，加入培养液，盖好瓶盖。将培养瓶放入含5%CO2的培养箱中在37℃条件下进行培养；
0 E1 g, q4 ^1 j7 b( ?6. 培养4h后，组织块较牢黏附于瓶底时，再轻轻反转培养瓶，继续培养；; \& p4 K% X6 M: W/ G
7. 培养3d后换培养液；