正常滑膜细胞原代培养（转）

细胞海洋

实验材料：* A5 ], ^) A" P; _* q# r2 ^2 N" ]9 t
1. 实验动物：大鼠、兔，人手术切除的关节等；" O2 ?4 d( p* w
2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2；! A2 q1 l& O# }. i
3. 培养液：RPMI1640培养基，补加15%小牛血清；
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! N( \# N4 s: _$ l* D实验方法：0 j) A7 a" h4 Y  q0 ]0 z) S% G* ~0 S
1. 将大鼠处死后，用75%酒精消毒；
2 D1 E) S, x& G2. 用手术剪剖开其四肢皮肤与肌肉，暴露长骨两端的关节，取出关节面滑膜组织置于盛有缓冲液的培养皿中；' d* i& u5 j3 g* \1 ^
3. 剔除滑膜组织外层结构及周边软骨组织，用缓冲液洗2—3次；
; g( B- W# N0 O7 p4. 将滑膜组织置于盛有少量小牛血清的培养皿中，剪碎成1mm×1mm×1mm大小的植块；$ u6 x2 w; ~; ^; ^( v! ^& Q
5. 将制备的植块接种到螺旋口培养瓶中。反转培养瓶，使植有组织块的一面朝上，加入培养液，盖好瓶盖。将培养瓶放入含5%CO2的培养箱中在37℃条件下进行培养；
+ |1 c4 A- ~3 e" k8 T# a6 x( l/ c6. 培养4h后，组织块较牢黏附于瓶底时，再轻轻反转培养瓶，继续培养；
. H8 l6 v4 k7 ]) n, e" }1 g7 r7. 培养3d后换培养液；