碱性磷酸酶染色

vae有何不可

这篇文献上的AP染色步骤较为详细，而且还附带了几张图。

yijuansss

DINGDING

zhbshi998

不错很感谢各位！

rubyrobin

谢了，正 找着

czzhaozhu

AKP染色具体步骤：
% u+ M& d5 d' C- I(1).        配制AKP缓冲液（100 mmol/L Tris-HCl，PH 9.5，50 mmol/L MgCl2，0.1% Tween-20）。
1 i% I! }. v9 z(2).        从培养箱中取出生长5~6天的hESCs，弃去旧液，PBS洗两遍，加入含7.5%蔗糖的1%多聚甲醛室温下固定30 min。
, D( w& o8 i0 f8 Y: i(3).        AKP缓冲液洗涤3次×10 min。0 ~. r  b" {. b2 I
(4).        配制新鲜的AKP染液：分别取45 μl NBT（nitroblue tetrazolium）染液和35 μl BICP（5-bromo-4-chloro-3-indolyphophate toluidinium）染液溶于10 mL AKP缓冲液中。
0 K) b5 o4 E* A* E% O(5).        加入染液，室温避光作用约20 min，自来水显色，显微镜下观察。
/ x& a0 z2 U$ H/ e" p2 m' s

lianmudichui

回复 zsc78 的帖子
5 N9 Q4 F+ k# d' h( I/ w/ Z6 Z# O6 s* `
你是用的试剂盒还是别的什么做的，详细步骤能告诉一下吗？谢谢

gact

回复 ouyangjuan 的帖子
4 y7 f  i+ e; Q
- e3 P) F0 W' w  \+ e/ L! j2 I显色液成分是什么？？？5 }) l4 n% z% B

gact

回复 是鸟就要去飞 的帖子: B7 Y  y9 w9 ^, K& \3 Q% }

% U, A# g' l- \5 h' e+ ~6 s6 o收集细胞是指用爬片做，还是要胰酶消化离心收集？

zsc78

回复 lianmudichui 的帖子
0 \$ t0 C  J) v$ t4 A
3 W; Y( z% l  h7 @- D- ]5 \! KMillipore的ALP试剂盒

dongxin

1. 按Vector blue Alkalin Phosphatase Substrate Kit III 配置反应液；- k& K$ [! J7 H3 J
2. 用PBS洗细胞2-3次；9 K, ?( T( t# J) h# }- |) n
3. 将反应液加入培养皿中， 37°C 避光反应0.5-2h；
4 S# W+ v% [  V3 |4. 弃去反应液，用 100 mM Tris-HCl, pH 8.2 洗一次；, I5 [& s: Y% C, p. P
5. 加入PBS，在倒置显微镜下观察。$ H# G4 L' h( Y. [
供参考，祝好运！
: k+ F& x: ~, Y  A