碱性磷酸酶染色

vae有何不可

这篇文献上的AP染色步骤较为详细，而且还附带了几张图。

yijuansss

DINGDING

zhbshi998

不错很感谢各位！

rubyrobin

谢了，正 找着

czzhaozhu

AKP染色具体步骤：
) J5 ]8 `0 c, X) \(1).        配制AKP缓冲液（100 mmol/L Tris-HCl，PH 9.5，50 mmol/L MgCl2，0.1% Tween-20）。
/ c: [7 I% q) c" {(2).        从培养箱中取出生长5~6天的hESCs，弃去旧液，PBS洗两遍，加入含7.5%蔗糖的1%多聚甲醛室温下固定30 min。( d/ b6 [) v) _6 o! Y- O; ]
(3).        AKP缓冲液洗涤3次×10 min。4 ^% n" q0 H# ^3 `* G
(4).        配制新鲜的AKP染液：分别取45 μl NBT（nitroblue tetrazolium）染液和35 μl BICP（5-bromo-4-chloro-3-indolyphophate toluidinium）染液溶于10 mL AKP缓冲液中。
3 a( R; c7 \- w: P! H3 d8 ~3 {(5).        加入染液，室温避光作用约20 min，自来水显色，显微镜下观察。5 I! f4 k0 }% q' y% T$ y

lianmudichui

回复 zsc78 的帖子8 t5 H, n6 v# \7 {! e5 b
5 D/ q1 M7 \' J' l  ^
你是用的试剂盒还是别的什么做的，详细步骤能告诉一下吗？谢谢

gact

回复 ouyangjuan 的帖子+ o# k8 J+ c0 e, o+ x) G& V
& b/ A8 I9 N( k' W7 v) Q4 c
显色液成分是什么？？？+ \7 [& {5 ^/ A$ g9 e

gact

回复 是鸟就要去飞 的帖子; c% p* [9 t7 o7 w
4 t0 `: a3 q+ i1 y: ?
收集细胞是指用爬片做，还是要胰酶消化离心收集？

zsc78

回复 lianmudichui 的帖子! P) B2 ~0 V6 N  e+ l  V: |7 O
" P7 a7 ^" y7 i1 t8 m' f% T) r
Millipore的ALP试剂盒

dongxin

1. 按Vector blue Alkalin Phosphatase Substrate Kit III 配置反应液；
6 j; X/ v* [* J8 k0 `, ]" M2. 用PBS洗细胞2-3次；
1 D. j. v( @1 _3 ^) L3. 将反应液加入培养皿中， 37°C 避光反应0.5-2h；' a/ v+ D1 V2 }7 [
4. 弃去反应液，用 100 mM Tris-HCl, pH 8.2 洗一次；+ q  \5 \' A; j( M3 j. U
5. 加入PBS，在倒置显微镜下观察。4 D1 F. q, |' ]* `( {
供参考，祝好运！0 M: }2 b$ o: R0 ^: w! i