求助小鼠骨髓间充质干细胞几个问题（附图）

cheese

会不会是细胞密度太高了，血细胞太多影响细胞贴壁，而且，细胞密度太高也会产生很多代谢废物啊

漫游天龙八部

1，建议可以在培养液中加入细胞因子，我开始培养兔间充质干细胞也遇到这种情况，到现在还不知道是什么原因。后来研究室的老师建议下加了因子，解决了,2，凝血可能影响细胞，我在 抽取兔骨髓时，将注射器内加入1000单位肝素。9 U8 Z# ~% a4 J4 H
个人意见，仅供参考。

bathpp2007

我也是刚上手，用全骨髓培养。结果还可以。我觉得离心不用太久，我是700r2min。去上清后重悬，多吹打一下，一定要吹打开。接种之后还是能看到很多血细胞，但是24小时换液后未贴壁细胞就几乎消失了。换液的时候我用pbs吹打了两次，每次大概15遍，我觉得间充质细胞24小时可以贴壁的很好了，所以不用担心吹走

郝晓英

回复 飞翔的十字架 的帖子/ y( U) x' B$ ~4 p8 m) a3 t
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你好 我现在也在养SD大鼠骨髓MSC
: `3 _. D4 ~  C& ]5 _/ A6 ?3 M方便加我QQ吧：847508395  注一下：MSC啊  呵呵
9 B1 h5 V6 [- @# l+ R/ R可以讨论一下啊

fengxuan

我 首次加20%血清促进贴壁，以后添加10% 血清，有细胞贴壁

lele

我遇到过这种情况，后来查出是血清的原因，换了批血清就好了

athena1988620

我做的大鼠是48小时换液，7天左右才有贴壁的，现在长得还不错 你再等几天看看

若兰汀

我说一下自己的经验，希望对你有帮助。1.老鼠的选取，我用4-6周龄Balb/c雌鼠，c57的细胞活力比Balb/c的强；2.老鼠断颈处死在酒精中浸泡5-7分钟，无菌分离双侧股骨和胫骨，我采用剪掉骨端的骨骺避免有碎的骨渣，1ml注射器吸取DMEM：F12完全培养基冲洗骨髓腔至骨头发白，冲洗的时候最好在培养皿上放一张尼龙膜可以滤过凝固的骨髓块。3.培养基为DMEM：F12+10%FBS；4. 24小时后全量或半量换液；以后2-3天换一次液，小鼠MSC细胞要传4-5代才能尽可能去除杂细胞。你需要保证纯度首先要保证细胞量要大，不然细胞很难贴壁很难养，分离的时候要保证无菌快速否则肯定会凝血凝骨髓。我有同学分离肺部内皮细胞，他在分离前把肝素钠注射到老鼠体内这样避免凝血，你可以试试。祝好运