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本帖最后由 细胞海洋 于 2010-11-12 10:57 编辑
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本人采用全骨髓贴壁法分离3只小鼠胫骨和股骨,用1ml注射器吸取L-DMEM 10%FBS培养基将骨髓冲洗出来,还用血管钳夹碎骨骺端,1000rpm 5分钟后至12孔板2个孔。3天后首次全量换液,至第5天仍不见贴壁变形的细胞,可能的原因?1. 我由于手法问题,将骨髓冲出时发现有些已凝结,但又尽量将血状絮状物冲碎,我园子里有人这么做也分到好些细胞,不知道这个是不是关键?2. 由于培养液的原因导致细胞贴壁不好(我用的进口血清)?, a e) A1 a* X) a# h' k; z
下面图是第五天的细胞,没有贴壁变形的细胞,请教这些大的圆形细胞(不是血细胞)是什么细胞,我刚取分完时在显微镜下看也都是这种细胞(除了血细胞),只是密度很大而已,所以请各位高手帮帮忙,急死了。4 J t% x" e: }# ~
9 E2 @- x) l6 C0 S4 Y3 I( g还有一问题想请教:我只追求细胞纯度,想采用Percoll是用1.073g/ml吗?我看有人用1.082g/ml,哪个更好,密度梯度离心适合分离小鼠BMSC吗?用全骨髓培养的BMSC纯度如何?
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