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求助小鼠骨髓间充质干细胞几个问题(附图)   [复制链接]

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楼主
发表于 2010-11-12 10:51 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本帖最后由 细胞海洋 于 2010-11-12 10:57 编辑 " l2 t; D. B" j- l0 m) R

( z4 a! T% M! H7 M$ e( r( Y+ @! E0 n本人采用全骨髓贴壁法分离3只小鼠胫骨和股骨,用1ml注射器吸取L-DMEM 10%FBS培养基将骨髓冲洗出来,还用血管钳夹碎骨骺端,1000rpm 5分钟后至12孔板2个孔。3天后首次全量换液,至第5天仍不见贴壁变形的细胞,可能的原因?1. 我由于手法问题,将骨髓冲出时发现有些已凝结,但又尽量将血状絮状物冲碎,我园子里有人这么做也分到好些细胞,不知道这个是不是关键?2. 由于培养液的原因导致细胞贴壁不好(我用的进口血清)?
! @5 G& f1 ^; p" `/ G* m( K1 x下面图是第五天的细胞,没有贴壁变形的细胞,请教这些大的圆形细胞(不是血细胞)是什么细胞,我刚取分完时在显微镜下看也都是这种细胞(除了血细胞),只是密度很大而已,所以请各位高手帮帮忙,急死了。
( s2 F0 ?/ |. w5 S) _$ k1 K# Q$ b9 \$ \. P; A: x
还有一问题想请教:我只追求细胞纯度,想采用Percoll是用1.073g/ml吗?我看有人用1.082g/ml,哪个更好,密度梯度离心适合分离小鼠BMSC吗?用全骨髓培养的BMSC纯度如何?
  ^# z- e9 H" i$ x2 L+ `' }
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沙发
发表于 2010-11-12 13:57 |只看该作者
3天后全量换液有点晚,血细胞虽然不贴壁,但是会沉降
$ m" R- z$ B  x' [我觉得最晚24小时换液
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藤椅
发表于 2010-11-12 13:59 |只看该作者
我最近大鼠MSC养的也不好,不管percoll还是全骨髓
6 O4 ?% `5 {1 C. s2 d/ V! C现在正在尝试protocol说的3h换液 以后8h换液直到3d6 \+ F& F/ M3 o8 a0 i
理论上说 贴壁细胞2h肯定能贴壁啦 不过换液要很小心% b5 a: C( Y4 ^4 t
下午再尝试下离心的 我用的大鼠是1.073
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板凳
发表于 2010-11-12 16:16 |只看该作者
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首先,细胞没吹打散。仍有些许细胞聚集。若有血细胞建议裂解,用无菌水几秒即可。大园细胞可能是一些粒细胞吧
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报纸
发表于 2010-11-12 18:05 |只看该作者
你用DF12代替那个L-DMEM试试。3 w: H. m* O' n& B$ T; ~  R
血清换成2%。
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发表于 2010-11-12 18:30 |只看该作者
我同学用全骨髓培养法养老鼠的BMSCs养的很好呢,24小时半定量换液,然后隔天换液,用PBS液冲洗,细胞培养出来,都开始传代了,你用淋巴细胞分离液,个人觉得不好,干细胞数量本来就少,还分离了再取,又会损失一部分了,并且培养的环境也破坏了。
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发表于 2010-11-12 19:24 |只看该作者
回复 5# daviddow
% o2 Y* i$ e: r
5 ]  {5 w# t7 g* B, l
3 j/ t& t1 B& ]' _6 P    2%血清可以吗?不会由于营养不够长得不好吗?

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发表于 2010-11-12 19:25 |只看该作者
我觉得这些大的细胞是中性粒细胞之类的,随着换液就都换走了,可为啥没有我的骨髓干呢?是不是有些凝血的原因?
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发表于 2010-11-12 19:31 |只看该作者
回复 2# 飞翔的十字架
4 }4 L$ t' t( i0 M
; j( x6 u6 x$ i4 I- }1 d* |+ U" }% S
& d6 h& B( }+ l! `. U! t$ U    谢谢,我试试

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发表于 2010-11-12 19:32 |只看该作者
回复 6# 267318024 0 w7 H6 a# w6 S6 ~# U  L

5 P' M' P& r' A4 b+ B1 m1 C$ }2 c: t0 M. G0 w
    非常感谢,可是我没有贴壁的细胞,是什么原因呢?血凝的原因?
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