肿瘤干细胞分选--盼高手指教

sanlang

老板最近要做肿瘤干细胞的分选，用的就是最近出来的ALDH做标记，再做流失分选。可是我们咨询了很多地方，都说做流式的分选很困难，一个是分选出来的细胞活性不好，第二是污染问题。请问高手们有什么好的指导意见吗，或者说哪个地方做流失分选做的好的，不甚感激。

leisong12

楼主说的是针对ALDH的流式分选很难做还是所有表面标记的流式分选都很难做？据我所知流式分选是最可靠的方法啊，虽然对细胞活性有一定影响但是不至于影响实验，至于污染应该不是问题，操作得当不存在该问题。

daviddow

要是1个标记物，你如果流式细胞术不方便，改成磁珠筛选好了

coldage

流式分选对细胞的损伤还是很大的，但是分选的纯度要高的多。
! h. q- f4 d+ Z# I( H  q7 \磁珠分选主要的好处是不会污染，而且细胞活性好。
6 W/ a/ P! c7 G7 }3 DLZ综合考虑，根据你的实验来选择，如果是单标分选，我倾向磁珠。

smallboar

流式分选之后细胞活力的确会有一定的影响，我们一般采用以下几点，可以略微改善：
" Q# E6 S9 D3 S& V1 N+ m1. 适当提高细胞密度，缩短分选的时间；
, c2 s4 x% u2 q9 v* U0 v/ P1 J2  可以用含3%FBS的PBS重悬细胞进行分选。
- Y8 b6 ]! z8 b; h/ t$ }至于污染，我们常规加抗生素，污染的几率不大。

jamquit

我看文献和咨询了下在做肿瘤干细胞的人 大多都是用流式做的, W5 ?- M1 y$ b6 Y0 R* c9 _3 [
不过一个申请了肿瘤干细胞大课题的老板说肿瘤干细胞的分选和培养都很难 毕竟细胞很少 * c* R3 h4 E! C6 I" H7 F5 |
这样的话我觉得纯度还是很重要的啊 用LS的方法如果能提高活性就最好了 毕竟养了还要鉴定

jhu132llh

要是只有一个标志并且阳性细胞少的话，做流式筛选还是不如磁珠；6 [6 ]' v5 @/ V
但是要是有2个甚至更多的筛选标记的话，做流式筛选更好，毕竟纯度要更好的；& B- g! ~& ]4 Z* C% R3 H7 l
至于污染，你在所有的液体里都加上常规的抗生素量，组合一点操作，一般是不会污染的；
  f% y/ a. G6 C, P8 d1 a要是不放心的话，你可以在分选液里多加点抗生素量，加至5倍什么的；# `7 H4 D; E9 t6 ]  y
至于细胞活性，肯定是有点影响，但是会慢慢恢复滴。

amosummer

可以做磁珠分选啊！活性和污染问题都可以解决！

shen_coco

分选出来怎么保证肿瘤干细胞不分化呢？这是个问题啊！

ziyan831008

流式分选只要保证上机前细胞处理无菌，分选仪无菌，基本不会污染；同时细胞不易成团，保持单细胞状态上机，细胞数量合适的话应该能够快速分选出来，对活力影响相对较小，可以用于后续培养。