小鼠MSC 始终消化不下来是怎么回事？ 求解？

get0715

原代就消化不下来那就从培养的方法上找找原因。原代你培养了多少天？中途有换液么？原代细胞不容易张均匀，传代时不需要一定长到80%。

2006goodluck

遇到这种情况，可以将培养瓶放入37度培养箱中静置一会。我们这里也有人用了半个小时才消化下来小鼠的MSC ，我的是大鼠的只用十几秒就可以了。不知道 是不是种属的差异吗？请高人指点一下

cigoo

如果消化液是在4度保存的话，消化的时候，你可以试着让瓶底有细胞的一面离酒精灯稍微近一些。这样温度可以满足酶发挥效率。消化可能会快一些。# Z5 P, m2 Z& F8 u) q7 a( B  B
也可以直接把消化液37度预热后使用。
# U/ D0 E, |9 C. h# y我喜欢用第一种。你可以试试

liujucool

有的时候细胞融合厉害了 就是不好消化 同一批的胰酶有的消化效果不错  有的就像楼主说的那样
7 J6 G" V/ C. V/ h7 D实验室一般主张吹打  禁止出现气泡 不然对细胞生长影响特别大    多练习几次就不会出来气泡了

ljj0558

可以确定，那不是MSC  O, M. b7 e4 r

angel-sakura

http://www.stemcell8.cn/thread-31358-1-1.html
7 v- S! e  l: s% R- \. J楼主请看这个帖子。
: J. D/ m) O( g- u2 J小鼠MSC原代确实有很难消化的情况，这个和大鼠或者人的MSC具有很大的差别。（又一次我消化了10min用0.25%+EDTA都没消化下来，后来染色发现这些细胞全部都是衰老的细胞。人的话1min0.25%胰酶就可以全部下来。）

angel-sakura

http://www.stemcell8.cn/thread-31358-1-1.html+ W3 \7 R* ]0 C( x3 d( B; E. t
楼主请看这个帖子。: L! u1 h$ p- O' Z. j  r7 f
小鼠MSC原代确实有很难消化的情况，这个和大鼠或者人的MSC具有很大的差别。（又一次我消化了10min用0.25%+EDTA都没消化下来，后来染色发现这些细胞全部都是衰老的细胞。人的话1min0.25%胰酶就可以全部下来。）

askage

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5 `  U9 }$ p5 y9 a1 @+ ^PBS漂洗两次，哥们。估计你血清残留，影响胰酶消化。我以前也遇到过。还有就是，添点EDTA.如果这样，5分钟内还没消化下来的细胞就不要了。

xiaodiao123

你的胰蛋白酶是不是很凉，最好在37摄氏度温浴一下。其次，你的细胞是不是成片了，成片的细胞特别难消化。你再多等会看看

若兰汀

你是自己分离的间充质干细胞吗？如果是对原代消化，很难消化，就不排除成纤维细胞的干扰。这种细胞比间充质细胞的贴壁能力强很多，而且原代细胞本身就存在杂细胞污染的可能。