外周血干细胞的冻存和复苏等问题！！！

文武庙

第一次开展此项目，有经验的高手说一下流程、所需耗材设备及注意情况，万分感谢，愿实验一次成功咯，妈咪妈咪哄

文武庙

看到别人做了，下面列一下其中的关键点，同大家分享下，有不足之处望大家及时纠正补充！
& b% R9 Y# O# D' b. n5 v6 v' n一、冻存液的配制：DMSO：1640为1:1（≤500ml）；在冻存终浓 度中占10%，提前配好，放置4℃冰箱，30min
% J. ^* I/ {: z二、白蛋白的加入：白蛋白的终浓度为4%-5%# A* X/ b! D+ e/ I% q9 w
三、冻存液与外周血、白蛋白混入时，因有热量产生，要轻摇，最好低温。
& s6 ]9 H/ q6 y. {: K四、放置到液氮前，要先在隔温箱中，-80摄氏度放置8小时以上。! R7 U4 M2 p! v% B5 i
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7 k( ~  Z8 Y( l( \欢迎指教补充！

蓝O海

楼上讲的比较全面了，主要是没说降温的方法，降温方法有俩种：1.最好用程序降温仪。，分俩段降，第一段：室温到-4度，每分钟2度；第二段：-4到-80，每分钟5-10度（我们用5度），太快影响细胞内的水分透出，太慢容易形成冰晶。2.将冻存管放4度10分钟，然后放-20分钟（必须细胞凝固）。有条件可以再放-40一小时，放-80一小时后投入液氮。谢谢。

sdjjfangfang

我觉得你在配置冻存液的时候可以考虑用培养细胞的基本培养基，我们一般都会用IMDM来培养的，你的基本培养基是什么呢？恩，还有冻存时最好是使用冻存盒进行冻存，第二天的时候别忘记转移至液氮罐里。

liuerfu

冻存时 放在-80几天会不会导致细胞死亡。？？？我复苏时细胞都死了，不知道是不是这个原因？？

cncpht

冻存直接放-80细胞当然死翘啦，冷冻细胞时一定要掌握好DMSO浓度和降温速率，复苏时一定不要等细胞全化开再去做，要留一点冰在里面，高浓度DMSO升至室温后对细胞毒性很大。