feeder制作问题~和ips应用问题

catmemory

我的mef用MMC(10ug/ml)处理3-4h后,消化接到明胶coat皿上，可是每次都会发现很多mef不能贴壁.是消化吹的太厉害？还是MMC处理过长导致？另外作为feeder，mef应该要铺的多密呢，养ips养的好的同学可以上张图参考参考吗？  v  h$ Y  J8 t$ o* k0 p
ips给疾病治疗貌似带来了希望，理论上是用病人的体细胞诱导成ips,再将IPS用于疾病治疗，但我想说，很多疾病比如肿瘤等等都是基因组出现突变导致，那么这些病人的体细胞诱导成的ips会变成完全正常的？怎么应用？！

BIOLOGY

为什么要把feeder铺在明胶上呢？这一点很不明白，我是直接把feeder铺在皿底，然后把ips铺在明胶上，feeder的密度一般是一个3.5的皿10的5次方个细胞，具体还要看你的培养液的血清是什么类型的，如果你的培养液中有FBS血清feeder可以稀一点，如果是KO血清feeder就要密一点。仅供楼主参考啊

张也行

可能是你丝裂霉素C处理的时间太长了，3h足够了。还有你的MEF是几代的啊，最好是3-5代，否则MEF的状态差。另外就是污染的可能，有没有检测过支原体？

iyaofying888

撤掉明胶即可

张也行

会跟明胶有关系吗？明胶可是能促进细胞贴壁的啊？

heather_lu

丝裂霉素处理3-4h不算长的。铺在明胶上也不会有影响，反而应该促进贴壁。处理前的MEF的状态要好，3-5代为宜。丝裂霉素处理后要冲洗干净，否则细胞冻存复苏后细胞存活率很低。

gact

受教。。

573639471

iyaofying888 发表于 2010-12-24 23:32
/ A2 e* N2 o! N' a) q& J8 ]撤掉明胶即可

4 W9 I4 V4 `  O0 W2 B3 `饲养层细胞不都是铺在基质胶包被的板上吗？

573639471

作为滋养层的MEF的密度最好是3×1o4/cm2

前途似锦

ips应用 我是不看好，虽然还准备要做，哎，骗了国家的钱