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去核针和注核针的制作
! K* G& N. {; \' T9 V' [打开拉针仪开关,调节各个参数,取已经清洁处理好的玻璃管安装到拉针仪上,按下“start”,拉针仪自动拉出两根玻璃针,细针拉好后准备断针。打开断针仪开关,调节好针尖与加热玻璃珠之间的相对位置,将细针内径15~20μm部位与玻璃珠刚好接触,似接非接。将加热温度调整到20左右,踩下脚控开关,当看到玻璃针与玻璃珠刚好粘在一起时,而且玻璃管尖端有变弯的倾向时,松开脚控开光,由于热涨冷缩的作用,玻璃珠即可断开玻璃管的尖端,得到内径在15~20 μm的平口针。然后将断好的平口针安装到固定柄上,调整好针口与磨石之间的相对位置,小心将针口落在磨石上,调节磨石转速为3000 rpm,30 s后再使针管往磨石上落,当看到尖端有变弯的倾向时停下,持续1 min后即可升起针管,通过显微镜观察尖端是否已经形成斜口。将撤下的针管连接在20 mL注射器的内径为1 mm的硅胶管上,将针管放入20%氢氟酸溶液中洗涤,注意,从放入之前,就要一直推动注射器往外排气,以免氢氟酸进入破坏尖端内壁,堵塞针管。然后依次在四蒸水中洗涤5遍,放入针盒,自然风干(如果是用水磨则需不断往磨石上加水,氢氟酸处理这一步可以省掉)。风干好的针管安装在断针仪上,调节好玻璃管与玻璃珠的相对位置,使针尖位于玻璃珠上方(启动加热时加热丝膨胀到接触不到针尖为宜),踩下脚控开关,使加热温度在20左右,调节细螺旋,轻轻使针尖落下,接触玻璃珠后当发现其尖端有粘在玻璃珠上的迹象时,快速升起玻璃针,同时松开脚控开关。拨出的尖长度不应该超过5 μm。技术指标要求如下:通常情况下,从变细处到针尖尖端的长度不少于10 mm。这样操作起来比较容易控制,胞质或细胞在管内运动较为平稳。另外,管壁越薄越好,操作起来误差较少。还有,针尖斜面以45º为宜。
" t$ x( j9 k5 q& g: S体会:把握要领,多练习,熟能生巧。
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