关于转染！

susanliuxue

我做293T细胞的转染和干细胞的转导有几个月了，转染时带荧光的细胞比例就不多，7 o% A4 K8 k8 {! U* }/ a" P
所以后面的转导就不可能是阳性啊！请教前辈，293T细胞到底什么样是状态好，细胞是
" S0 [% ]( {5 V圆的还是铺展开有突起，我的293T细胞从别人那拿来时就传了数不过来的代次，关于转染+ i3 h. t: h& ^4 m7 c
请大家不吝赐教！感激不尽！

carolshen

回复 susanliuxue 的帖子5 {; v3 t) S( J1 I. [- B: @
" x: }: U7 q' [! c8 O2 a
http://gene.bjmu.edu.cn/science/1/5.htm，这是关于293T方面的简单介绍，当然在ATCC中也会有关于HEK293T的介绍，包括培养条件等。
7 n5 y% _9 w2 ^9 `6 p3 k" u  ]293T转染效率低的因素较多，例如，细胞状态，转染试剂等
( G2 K2 i) {4 Q$ q7 W质粒的纯度也会有影响，当然构建的载体中，启动子等，也会使荧光量降低……
$ Q! g. B& h( e' F; q- N; I. X293T为上皮细胞，呈梭型。不知道这些对你是否有用，不当之处，望赐教！

ws241

二楼的，293t细胞应该为不规则的星型。
  R1 _$ V: _( v1 ~5 u: I另外转染的时候要注意细胞的融合度大概在80%，质粒的浓度不要低于0.5ug/ul。最好用无内毒素处理的。
2 S7 C0 J/ Y" ^, N. G/ v如果荧光的强度一直不行的话，楼主最好使用排除法。先用可用阳性质粒转染293t，排除细胞的的可能。然后在确定质粒是否有问题& O, k* p  U# f# a8 H7 d

trl137

293T细胞的增殖能力很强，所以它的传代次数对转染的影响不是很大。转染时，细胞的汇合度对转染效率的影响很大，最好预先做个比较，这样效率会高些

daviddow

你还是换个细胞试试吧。估计就是293T细胞的问题，早该换了，不该这么长时间。

susanliuxue

感谢大家的帮忙。我现在在找是不是质粒的问题，跑电泳时RNA污染严重，不知道是不是影响很大。3 J6 |; ?. v1 x. B0 H
会影响质粒的浓度吗？

ws241

质粒对于转染结果非常重要，最好是同一批次大提的质粒。推荐使用Qiagen的无内毒素大提盒子，不过巨贵心疼啊。质粒的浓度不要低于0.5ug/ul。对于转染的质粒比例最好自己摸索一段时间。

syl1982

回复 ws241 的帖子5 k: b  k. x6 ?# O" j3 h6 w

* S& ]) n0 v- `+ \$ E4 w% h严重同意你   我也是 在这篇 文献看到的 所以就买了 分享给大家 Soluble epoxide hydrolase plays an essential role in angiotensin II-induced cardiac hypertrophy. 2009 使用了Qiagen公司的Superfect来转染质粒DNA入新生大鼠心肌细胞

fantafiction

本人新手，从未接触过细胞转染，最近要做成纤维转Gfp,跪求详细步骤。

yangpan521

293T细胞状态好坏的鉴定，鄙人有些许观点。1.在传代时状态好的细胞很容易消化下来    2.接在新的培养基上是在镜下观察细胞，状态好的都是圆圆的  3.贴壁时状态好的细胞会伸出很多触角，细胞看起来很有旺盛力。 4.当细胞长满是（也就是大约95%）这是细胞会很拥挤，但状态好的细胞仍会呈现圆圆的。