免疫荧光染色问题

lorey

请问各位大侠：3 c( Z2 a7 y' }. A* }' @
    做免疫荧光染色实验时，如果细胞本身表达GFP，实验中GFP会不会淬灭？选择二抗时是不是不能选发绿光的了？

liujucool

如果二抗选择FITC的话 做的组化片子是特异性染色还是本身GFP的发光 不好解释

开心果王

固定后gfp一般不会淬灭，二抗当然要选非绿色标记的，不然会造成假阳性结果了。

jhu132llh

细胞本身表达GFP的话，是不怕实验中荧光淬灭的，因为只要细胞还活着就还可以接着合成GFP的。但是不要给细胞太大的刺激。
2 y) g( z/ s9 X5 e6 W( w% d/ r抗体染色的时候尽量不要选绿色的荧光标记，可以选红色，橙色，黄色。。。。还可以二抗连酶，做化学显色。
! r, {* X& k7 z* G5 _实在要用绿色的话，一定要做阴性对照。

hcluo

固定的细胞本身的GFP是不会淬灭的，另外，细胞本身的GFP可以通过紫外的激发光来刺激GFP发出绿色的荧光。因而，要区别是否是本身的GFP发光，建议不要选用FITC的二抗，可以选择TRITC的抗体。