引物合成

鹤顶宏

请教有扩增4kb左右的片段是，引物序列长度于小于1000bp的片段相比是不是应该长一点

痞子的烟头

4KB片段PCR本身不太容易扩，引物序列最好长点！

绿雪

引物长短倒没有太大影响，用合适的酶就行了，有些聚合酶是专门扩长片段的，你可以咨询厂家。不过要是在质粒上扩的话，普通的taq酶也可以，我试过扩4200bp的。

weiyepan

引物合成最要紧的是特异性，长不长不要紧，关键是Tm值要够。
7 o8 C) R( y# X楼主要的什么基因？
8 T4 y, Z0 U! u) X5 J

鹤顶宏

& E0 l1 k3 H/ ~5 Z" L4 r1 k; y( E6 W2 N3 p& V" N& V) ]) w
回复 weiyepan 的帖子9 H1 r, Z% x+ n; H& n+ b

- A8 {% W4 N- Q* g( A猪抑制素的基因，
+ I$ E7 {, H) e1 X: m' Q$ ^' @Tm值要够是什么意思，还望大虾明说一下

l123w456x789

正常的引物就可以 25BP吧
1 S( a$ X$ ?9 Y! E; }  j关键怕扩增不了的话用阔长片段的酶
; ?$ ]2 s- W- s/ q" j- c这种酶不少，TAKARA有一种叫 LA taq的酶 专门扩增长片段，似乎配有专门的BUFFER，买来看说明书直接就用了，和普通TAQ扩增方法一样的

weiyepan

Takara的酶扩增是可以，不过突变率太高，基本上1000~1500会有一个突变，我们基本上现在不用。; h% p5 b/ m0 d4 W! z: M
我们一般还是用NEB的Fusion酶，配takara的buffer，括高GC的很好用。

weiyepan

回复 鹤顶宏 的帖子
' _. a; {2 r! I+ a# m" j2 M) C0 r! J
设计引物现在我们一般用Primer5，自动算Tm，一般Tm拉到55以上，然后错配的自由能不高于20，这样的引物比较好用。

鹤顶宏

回复 weiyepan 的帖子. u8 N* J9 z4 t

. {& {! g3 g# o. C# d* \谢谢，元旦快乐