mitomycin C处理3t3细胞后的贴壁性

pheebs

我用10ug/ml mitomycin C 处理3T3或者MEF 2h 后，冻存，但是复苏后的细胞都不怎么贴壁，怎么回事呢？板上有用geltin 包被过。

lemma710

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. H( {& {: R' f) p是不是细胞冻存有问题呀~

张也行

你复苏后什么时候看的，是不是再等一下。

hcluo

复苏要快，而且尽量快的离心去除含DMSO的冻存液，换用新鲜的培养液。另外，冻存的时候可能出现了，问题，对细胞损伤很大，所以细胞会出现不贴壁的现象。

rainsky1314

请问：mitomycin C 处理3T3或者MEF 2h 是为了什么？还有，冻存的时候有去掉mitomycin吗？& }% g- b; @9 }3 H! i

chochochocho

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首先，micomycin C的使用浓度和处理时间是没问题的；那么，出问题的有可能：冻存前的培养，处理后的保存或使用前的复苏。我们是培养到P5（confluent）MMC处理，PBS洗，冻存。Geltin处理30分钟以上种。Protocol要求使用前一天准备feeder，不过MEF贴壁6小时也够了。希望对你有帮助。

chochochocho

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提示：Mitomycin C 的作用是阻断DNA复制。建议你再好好思考一下你自己提的问题。

xufeng8686

回复 hcluo 的帖子$ R% C* U8 t& {' i0 t4 j% t
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不用离心的吧，第二天细胞贴壁后换新鲜培养液就行了。我一直都是这么做的，而且重没出现什么问题的。

hcluo

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个人觉得DMSO如果存在的话，对细胞的生长不是很好，所以尽量离心去除，更换新的培养液。