欢迎培养MEF细胞的同仁们进来分享一下培养经验

huozhicb

过两天我再养，给你算算

mbjane

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+ K3 M9 B5 Y# {6 w4 W, o3 s
$ h1 h8 J( o' R( a8 }非常感谢您的回复。根具最近的实验数据，我也感觉原代铺板适宜密度与您的经验（8个小鼠可以铺到6个10cm dish）相似。- L$ G6 c6 i5 W* z1 [
说到传代，我只发现细胞形态逐渐变大，立体感越来越差，没有发现变得小小的？这是什么原因呢？

igdb

消化15分钟太长了吧，我一般都消化5分钟，两次。绝大部分组织都能被消化成单细胞的。。

happygrass333

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  p  a& H. `1 k! z9 F/ h; Y
& J2 t7 W- h- _0 o3 f% {& ~MEF是单层的，本来就没有立体感。比较好的状态是刚铺下去的时候大概2小时你观察它呈圆形，有突起，有的看起来跟太阳一样中间一个核整个细胞铺得非常的开，但是第二天可以发现细胞进一步伸展变细。后面营养要是不好了，会细细的变成丝。你说的情况是不是因为小鼠的种类不同造成的，我们是昆明白。

mbjane

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* u! M5 o. W$ P' z" S. a. S' p$ N+ h/ S+ }0 }( @: v' {9 l- c
我们用的是近交系BALB/C

mbjane

回复 igdb 的帖子' |( c- h- P# I/ @! @. J' b
8 m& ?# E2 ~. N/ r1 S
5分钟就可以了吗?胰酶浓度多少啊？
) v8 b) P: z- R" Y3 q, ^& P& {

happygrass333

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4 q+ P! E% e# U- O
# P/ N8 L9 Q% }8 x8 `我们只用过一次c57，不好，又回归了昆明。

igdb

回复 mbjane 的帖子- N1 o" Z+ a7 I- N7 ?* V
4 p, ~8 n# @7 e/ ~0 M) c4 f8 X
0.25%

jhu132llh

1.PH是7.2；
/ G4 B( _+ k' y/ @* ?. j0 |/ }2 b2.接种密度为一、二只/皿；胚胎要去头，去四肢，去内脏；
# @! }. k9 s. Z! }* V! E" P; L3.MEF在三代内使用，不要传出三代，细胞状态不好；
7 J* Z" k1 o+ L0 }5 B: t0 C4.MEF状态的简单评价：增殖效率和细胞形态：要求细胞增殖快的状态好，要求为典型的成纤维细胞特征的好，要求细胞结构清楚无大脂滴泡无大黑点为好；$ q# Y4 X! w; g  I" \% v
5.原代一般长至80-85%时传代，一般是原代2-3天就能传代，传代培养一般是2天左右传代；
1 \- l0 I8 }  `- I! D, v6.孕鼠主要通过检栓来了解准确怀孕时间，检栓是为第0.5天；1 g: x) z1 U4 X$ t+ b% J4 `

bubble_w

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. j- D. b' D7 E2 f
1.原代培养一般2天即可传代，最多也不过三天。如果超过三天还没有达到传代的标志建议楼主再做新的原代。
/ d) h9 c* e& f5 |' J2.孕鼠的状态我们一般不做太多的评估，主要是饲养条件要清洁级，而且尽量选择每年的四月至六月以及九月至十一月去配老鼠，这时段效果比较好。还有一定要去除寄生虫，每个月对鼠房进行熏蒸，老鼠喝的水最好高压一下。如果能做到以上这些一般都木有什么问题了。小鼠的品系最好选择B6D2F1，ICR也可，昆明小鼠最好就别用了。
% j  Y* c' I3 I0 y1 q; D! o/ h+ l6 ?3 X3.尽量去除MEF以外的细胞，主要是操作过程中多剪掉一些，不要舍不得。胰酶消化的时间要短一些，尽量使用剪刀将组织剪碎一些。9 f; |# N# Y& ]9 }' D" Z
4.不知是我上次回复的不清楚还是如何，我的意思是尽量留一些小块的组织块，会爬出很多细胞，而且细胞生命力很强，状态较好。有时我在传代至第二代时仍有少量的组织小块，非常小，细胞状态极好，基本是每天都要传代，传代比例是1：3.9 J. s* ^! P$ A; c/ A! l
5.我不知道你的皿的多大的，我一般是大皿（100mm）8-9×106/皿。) R2 T/ t/ V) q4 d. X