质粒电转问题

jefferson

第一,你的质粒是多大的? 一般大于10KB的质粒电转没转进去也正常, 质粒大的话电转时DNA的量应相应的提高.
2 p  s* @- X5 F4 ~, O; ?; |第二,你的质粒是整合型的还是普通的表达质粒?如果是整合型的,电转后先培养几天在加G418是没问题的,因为外源基因可以稳定表达;如果是普通的表达质粒,那么其在细胞内多数以附加体形式存在,当然也存在少量的随机插入,这样的话最好在24h后就加G4182 L+ G0 ?. ~- c% H: [2 u
第三,个人觉得你的G418浓度是不是太高了.而且筛选时,我们是按照药物浓度从低到高加的. 建议从200加到500试试.