gelatin

carolshen

请问大家都是怎么使用gelatin的呢？ 例如配置的浓度，铺板时间，是否干燥等等……

BIOLOGY

浓度为0.1%，配好高压，用Mili Q水配，高压完放4度冰箱。一般明胶有两种用途，一是悬细胞，也就是去除干细胞中的feeder，这种用途的明胶铺半个小时就够了；另外一种就是养半贴壁的细胞，如Plat E，这种用途的明胶最好过夜。不同培养皿加的量适当即可，覆盖皿底，用前不能干。个人意见，仅供参考。
! E$ J1 D0 R% d! j

carolshen

回复 BIOLOGY 的帖子
0 A' T& R2 P% w! _- i. l0 `* r( F
* ]* c3 d: F2 l( c8 P& {嗯，谢谢！

是鸟就要去飞

回复 BIOLOGY 的帖子+ G% \) z% d( o
6 b: c4 d$ V9 q' e1 L: H' I
请问你们的gelatin是什么牌子的，买时是粉末的么？

heather_lu

Millipore的明胶，0.1%的，500ml 200多元。还挺好用的。

friendly0722

我们实验室是配成10倍的储液。

splinkerette

我们实验室的明胶是omega粉的，用PBS溶，配的储液浓度为1%，灭菌后4°。养ES或者EC细胞的工作液浓度为0.2%，明胶铺半个小时（孵箱中）即可，用之前将明胶吸出，可用PBS洗一遍，也有看过有实验室用培养基洗一遍（个人觉得没必要）；干燥的话，若是不用PBS洗，可以将明胶吸出来后干燥半个小时。6孔板我一般加1ML，10cm皿加5ML（这个量是稍微奢侈了点）。

fish_zbw1985

回复 BIOLOGY 的帖子
$ ]8 }+ S$ X2 n2 I7 n0 _0 V' \7 c6 w( O/ I6 T
请问明胶悬细胞去除feeder是怎么做的？谢谢！

BIOLOGY

回复 是鸟就要去飞 的帖子
# x6 t9 e6 Q: B4 w6 ]0 V9 c
3 G) {. x2 c% X9 ?& d  X% FSigma的，是粉末

BIOLOGY

回复 fish_zbw1985 的帖子
$ g$ a( d3 ]- w2 c) \. Q1 L# P8 X9 I4 V1 M& v, U4 Z$ L
把干细胞和feeder一起消化下来，种在铺好明胶的3.5cm的皿中（把明胶吸干净，加入2ml液体），半个小时后feeder因为比较大就沉的比较快贴明胶上了，悬浮的的就是干细胞，吸出液体离心就可以得到基本无feeder的干细胞了