细胞培养中有空斑是怎么回事？

张也行

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请教大家一个问题：培养293T细胞的时候偶尔会遇到一个现象：前一天传代，第二天大部分细胞贴壁，但是中间有一些地方有几个小空斑，里面散在几个贴壁的细胞，经常是两三个空斑连一块，好像小熊踩过的脚印一样。还没有换液，所以不可能是因为换液时冲掉的，液面上也没有漂浮的球球。我们这里好像没有做过很多病毒相关的实验。请问各位这个是什么原因呢？会不会是污染造成的？我也没有照相，不知道大家听不听得懂。

tangyvhuang

这个情况我遇到过，楼主的瓶子是不是反复用的？如果是的话就是瓶子的问题，293T本身就是半贴壁细胞，贴壁不是很牢，如果瓶子反复用的话会遇到这情况，有的地方是贴不住细胞的，如果楼主的瓶子是一次性的那种，我就不清楚了

张也行

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. M; a# W4 x' P; c0 q& I, U谢谢你！" ]  Q! C: ]9 I6 U+ r! \1 }: Z
我用的是10cm板培养的。但是，在新传代的板子里也有这种情况。我记得看过一篇nature protocol上讲简单的换液，传代的文章，里面有提到传代前检查一下单层细胞上有没有污染，检查有没有空斑（plaque）之类的，是不是有空斑说明有轻微污染之类的？

ligangcw

10cm板以前也培养过细胞吗？有些公司的那种板不好用，我们吃过这种亏，JET和corning的还行

张也行

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9 K5 [) W9 ], u8 w2 B( w( v$ P1 _恩 用的corning的，没有用过啊，新的。呵呵

清影

回复 张也行 的帖子4 _7 B. |# j  X7 e2 N
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感觉和培养板有很大的关系.可以一一排除一下，比如血清，培养基，添加因子什么的……

碧海蓝天

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. p% L  h1 |1 g3 n这种问题比较常见,一般是细胞传代过多,贴壁性能减低,但细胞活性还不至于太差,这样的细胞会越长越差;还有一种可能就是细胞接种密度过大,有的地方密度大到细胞完全不能贴壁,所以就出现了空斑.病毒呀、细菌呀这些污染的可能性不大.+ V+ z0 X, k6 o
处理的办法就是减低接种密度，加大或减少培养基中血清浓度，可以分出三瓶，1/3瓶细胞原浓度培养基培养，1/3瓶细胞加大培养基中血清浓度，1/3瓶细胞减少培养基中血清浓度，你试试看，祝你好运