培养皿包被的问题

esc123esc

请教一下，养MEF或者做feeder-free培养的时候，大家培养皿包被是怎么处理的？很多人都是用0.1%gelatin来包被，然后种上MEF，但是我用0.1%collagen包被的就不太好，丝裂霉素一处理就会挂掉很多，那块就空出来了，没办法用了就，只能用1%collagen包被的还行，我想问一下，gelatin跟collagen有多大差别啊？为什么大家都要用gelatin而不用collagen呢？还有就是如果做feeder-free的话，培养皿大家都是怎样包被的呢？我用collagen 包被了之后ESC完全就贴上去了...完全不成克隆的样子

是鸟就要去飞

帮顶一下
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mbjane

期待答案

fish_zbw1985

用明胶包被是最常规、最经济的方法了，个人认为除了增加细胞与培养皿材料之间的贴附作用外其营养物质对细胞也有一定的支持作用。明胶包被一定要铺满整个培养底部，使用前不能干了，37度半小时以上。我觉得你应该考虑一下丝裂霉素的处理时间和浓度是否合适，因为这个条件对细胞的存活和有丝分裂活性抑制是很关键的

wxyWXY

做小鼠的es或者上ips不用明胶包被就可以

jefferson

    有点没明白, 为什么你是先用gelatin包被后种MEF然后用丝裂霉素处理的? MEF本身贴壁是没问题的, 包被的目的是为了让ES或者iPS能够更好的贴壁,因为这些细胞是不易贴壁的.
+ J  b' E/ o- M' g  l- r    处理MEF应该是将MEF在普通培养瓶中养至P3代后, 加10ug/ml的丝裂霉素处理, 然后消化冻存备用. 用的时候首先用gelatin包被培养皿,然后接种上处理过的MEF,再种ES.
% o# U- K  H- a3 g# p    做Feeder-free的培养, 最常用的是用Matrigel包被.

wangyimei

原代培养MEF的时候原来可以不用gelatin包被啊，我之前一直是先包被来着，然后种MEF，再用丝裂霉素处理。

sanfa

mef不铺明胶 直接种皿上 P2 mmc处理后 消化冻存 用的时候直接复苏到皿上就是feerder（这部可以铺明胶也可以不铺）