脐带血间充质干细胞培养

Learner

各位好！我是新手上路，最近在提脐带血间充质干细胞，.遇到一些问题希望和大家交流。7 j8 c) C$ {9 x+ a9 i" D
1。选用哪一种培养基最好？我现在用的是一般的DMEM高糖培养基，我看有些文献说用低糖较好。血清的浓度应是多少？我用过10%FBS生长很慢，其中未加任何生长因子。最近试了一下20%FBS好像有改善。同时又添加了一些不BFGF。" L, \8 H( S) J# H; R
欢迎这方面有经验的同行给予指教。

lunyuyuanxj

MSC培养所有培养基不尽相同，有用低糖的，也有用DMEM/F12的，也有其它的。血清浓度一般10-15%，20%易致细胞老化和分化。

Learner

回复 lunyuyuanxj 的帖子
4 J5 Q% v+ m: Q, o$ b2 ^" O- U  u9 `- `. G
谢谢回复！刚刚只说了1个问题，还有就是，我在培养中发现成纤维细胞中夹杂着很多圆形的细胞，这些细胞是什么细胞呢？淋巴细胞？上皮细胞？有没有没人查到过脐带血有核细胞组分的文献？我查了一些还没找到。

linxuan0604

淋巴细胞的可能性比较大，上皮细胞也不是圆的。0 p3 k0 T! n' t, `# b0 a- M

0 \1 h: W" p( Y' j* R7 ]另外，培养基里其实加10%的FBS足够了。

Learner

回复 linxuan0604 的帖子0 P1 R% P  R) o+ a) |" K" C7 {

$ J2 H  F) w& o& K1 \谢谢！

zhangzhiyou

我做的NT-3修饰的神经干细胞 移植治疗脑瘫，修饰的神经干细胞我也在培养 是那样的 开始很多杂志，换液传代数次就好很多了，

susuloveq

回复 Learner 的帖子4 o' t1 {6 v$ e0 l9 r$ C; T7 p

9 w5 l  q$ L* ?  Y我培养的时候也有很多圆形的细胞，正疑惑着，你养好了吗？？梭形细胞出现没？？

Learner

4 k9 l  h$ T" J2 w6 d9 p
: Q1 b, p& b0 z& c' Q回复 susuloveq 的帖子6 b4 V& \5 A1 j9 z4 X0 o. J+ Z

/ q! u% i& ^; D5 o& C上周五第一次传代，传代后还有很多圆形的细胞，有的体积形态很大。再边养边看吧！望多交流。

fengxuechunyang

如果就是养MSC我自己觉得不用加生长因子，因为骨髓的，脐带的都不用加生长因子。胎牛血清一般用10%的。关于培养成功率的问题，我曾经用淋巴细胞分离液做过，可能是脐血取得太少，反正没有成功。另外分离的离心机很关键的。不知道你的脐血怎么取得？祝你好运！

Learner

$ O/ j  i) l- V# X4 V& c6 ?0 J  _0 `, s2 D# d% g) n
回复 fengxuechunyang 的帖子+ M# T: Y# Z' E7 ~
7 u$ d- _  k# J1 @$ Q! H( N5 |- g: L
我每次大约有120毫升脐血，80-90毫升也应该够，也是用淋巴细胞分离液做的，第一次做只有一个培养瓶里的细胞长起来了，其余种在在10厘米培养皿的都不太好，好像这种细胞更喜好pH值低一点的环境，个人感觉而已。细胞生长还可以但不够纯。昨天第二次传代，用0.25% 的TE很难消化完全。我把没消化下来的都弃掉了。（前后一共花了一个小时，TE用了4毫升也没消化完全）这次我将它们都转到玻璃培养瓶中了。- f, C# [4 F; k( z) ^1 J
离心机我们实验室只有一台我也没什么选择。我每次用15毫升离心管（康宁）分离，管的直径越小分离效果越好，50毫升管（康宁）在加样时就很难形成上下两层清晰的界面，很难成功。