斑马鱼胚胎显微注射（QT格式）

珊野love

回复 jdrkna 的帖子1 W: k, G. a, L. r

4 V1 Q. W, S) e* z. [0 h楼主能不能发给我一份啊，等级太低下不了，谢谢了，邮箱taoran0227@163.com

ying

回复 珊野love 的帖子
* N# b% l+ H2 ]: i# R+ h, U  b' [
8 c8 ]. ^; }, n! o) q我一般打1-2nL.   注射针我们是在鱼房做的，他们有个拉针的机器，我不知道他们怎么设置的参数。针也有不同类型的，你是要打算自己买自己手工拉吗？
" `0 b; [7 Z: ]0 z& i我打动物极的方法是，先把鱼卵在琼脂板上（那种特制的带有凹槽的那种，你知道的）排好，然后用个拉过的枪头（火烧一下，化了之后一拉，拉成不粗不细的一根丝丝）一个一个拨，拨得动物极朝上。然后再打的。之所以要用拉过的枪头来拨，是因为比较软不容易刺穿卵，又比较长容易操控。
' X, H# V4 v3 I' G4 ^+ S6 N2 X5 O话说，你如果不是做转基因鱼，而是仅仅是打morpholino或者合成的mRNA或者类似的小分子，是不必要打动物极的，任何一个角度打了，尽量往卵的正中间插，打了就行了。5 M1 `; I* M+ F# K' p, R; f! B
在卵产出后10-20分钟，动物极一侧是透明的，另一侧是卵黄，很容易看见的。如果看不见，稍微把卵拨一下换个角度就可以看见。一般正常情况下，动物极是自然朝上的，所以拨一下就能看见。在45分钟之后，动物极就开始分裂了，就更容易找到了。" F- O0 L  p; C" U) W% C* H$ ~& P

ying

回复 珊野love 的帖子
8 `5 d" e. r# y5 D3 j( L0 M; t) S% Q
注射mRNA一般可以打400-800pg每个卵，注射morpholino一般是4ng-8ng。多了会有非特异性的表型。

珊野love

非常谢谢，我是做转基因的，第一批检测结果就是没有转进去，当时因为找不到动物极就直接扎到卵黄中间的位置了，因为放在培养皿上没有水，卵还很小，所以看不到动物极，你说的琼脂糖的那个孔是胶孔还是有特殊的专门显微注射的那种啊~~

珊野love

回复 ying 的帖子
/ U! b6 `. a. l0 ~- X* B' n' x  m0 G5 L! F5 E0 W
注射针我们也是用拉针仪拉的，里面也有好多程序，但是不知道哪个好，有的特别细都打不出来液体~~

ying

回复 珊野love 的帖子! M+ q- p* B# ]1 x

4 O& x+ b/ e4 P  o1 U话说，你是用的体视显微镜操作么？体视显微镜下面看，是一定可以看到的啊。卵再小，倍数调高了也是很大很大的啊。不用体视显微镜估计没人能注射到动物极吧～
5 u, s; z  r9 `7 P# g: |6 F琼脂糖板子是有个专门的模具，模具扣到琼脂糖上面，凝固之后就成了几排槽子了。你是上海的吗？是的话我的可以借你先用。
7 Z! C4 c8 _( `. E4 A4 O" @我也不知道拉针是用什么程序。你可以询问一下清华（？）的孟安民组或者神经所的杜久林组，或者生化所的李逸平组，他们的程序是怎么设置的。你也可以按照各种程序都试试，然后选一个好用的嘛。

珊野love

回复 ying 的帖子. P0 E  C) e) B' _7 ~

7 p% {% f- v3 z/ h+ @2 _5 H1 v3 O8 F非常感谢，我们用的就是专门显微注射的显微镜，我不知道是不是体式的，老师说找不到动物极，因为培养皿中没有谁，没法漂浮。我原来在上海那边，那边有好多同学，不过现在来哈尔滨啦，嘿嘿，离你们好远呀~~

lizzychen

回复 jdrkna 的帖子! ^. K4 _  `) \0 Y  [
9 g$ W$ v: I! B( E
在做这个，但是级别低了下载不了，麻烦LZ给我发一份吧，谢谢哈！174499907@qq.com

lizzychen

楼主，你好，想问下你一般每个卵打多少量？定量你是用mineral oil测量液滴的直径么？期待回复，谢谢！

runsong

回复 jdrkna 的帖子; u; }3 k) U2 J! n. B: C- r
' y* w; W3 p2 W8 X" i9 B& P
我这里网速太慢了。请传一份1 U3 c) O, i% K
5595758@163.com