求助：肿瘤细胞系无血清悬浮培养换液

qyguoguo

各位老师：在细胞系接种到无血清培养基内时，开始几天一般都是怎么换液，因为细胞碎片很多，我尝试过离心，死细胞团会再次出现在培养液内，如果是半量换液，又会丢掉大量细胞，求解，谢谢

一枝独秀

最关键的是接种到无血清培养基时细胞的状态和密度，最好在对数生长期且高密度；如已经有细胞碎片又恐丢失细胞，不妨将培养瓶倒立静致待细胞沉下来，轻轻吸掉上清，连续重复2-3次，多半会好转；若想离心速度不要太高500-800转5分钟即可

leisong12

我也有个问题，是否做无血清培养必须用低黏附的培养瓶，能否用普通的玻璃瓶养。悬浮培养刚接种后细胞贴壁，待2，3天后细胞才脱离瓶壁并有成球倾向，这种现象正常吗？

shuishanglingzi

离心速度太高，对细胞有很大的伤害。如果500-800转的话会有部分细胞悬浮在营养液中，造成细胞损失。所以我觉得还是将培养瓶倒立静致待细胞沉下来，轻轻吸掉上清，连续重复几次较好。这样虽有细胞损失但是对瓶内细胞不会有伤害。

qyguoguo

回复 shuishanglingzi 的帖子3 F/ ?/ P' t4 p9 c8 C6 t$ o

9 V! \/ i& }# v7 r3 I: a5 J请问老师：如果是静止的去放置，一般要放多长时间，一般的低速离心都会有部分细胞的损失，那么静止后的半量换液会不会损失更多，因为我我尝试过静止去换液，大部分细胞还是会悬着，不知有何指教？谢谢

qyguoguo

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我曾尝试过用玻璃瓶去养 ，因为玻璃是不容易粘附的相较塑料的瓶子来讲，效果肯定是比后者好很多，但与低粘附的皿没有比较过。

qyguoguo

回复 一枝独秀 的帖子1 a$ {- L& D! R( R: H
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高密度？老师布置一般接种多少每毫升？因为如果密度很大的话，第二天你就会发现大量的细胞会黏附在一起，很多都会是死细胞，且培养基颜色会变的很快，对后续的换液影响很大，不知老师是怎么操作的，可指教一二？谢谢

shuishanglingzi

回复 qyguoguo 的帖子: Z$ d) r( T' D* {

5 N5 `1 C) Q5 K8 z  g3 n/ j6 `" [第一次换液时，可以直接往培养瓶中加入等量的新鲜营养液，当然要注意培养瓶的最大容量。后面换液前静置10-15min, 吸液时动作要轻，把握好力度和方向。细胞损失还是必可避免的~~

jojomayer

我也是刚刚开始学着做无血清培养胶质母细胞瘤干细胞样细胞，我的老师说如果要每次换培养液都离心的话，几次下来细胞就都死光了，各位是不是有什么经验上的离心转速？我们实验室中号的那台离心机最低转速是500rpm，我甚至还想着能否用小离心机上的那种“一键离心”来摸索一下看哪个速度离心最好。（不好意思不知道那个叫做什么功能，就是用来配制工作液的时候，稍微离心一下那个冻干粉的管儿用的）

细胞海洋

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