关于丝裂霉素处理MEF

zsycgz

常规就是2mg一支的。至于不同型号就不清楚了。其实只要是“mitomycin”就应该没有问题。

573639471

zerollx 发表于 2011-2-28 14:53
0 E* ~! Y( U: g2 F6 d+ G* H1、用DMEM 配成储存液、分装小管、-20度保存。用的时候取储存液用DMEM稀释至工作浓度，避光4度保存，最好在 ...

) L! O( \0 m% d/ X, u6 x& P( t( h, i2 y- B
关于MMC配制，sigma的细胞培养级的粉末配成储存液必须过滤吗？

zerollx

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0 {; C* q; y6 S' G# \- ~' g" C7 R2 m5 J+ f$ t. S7 L) S6 j( x
嗯，0,22um的滤器过滤除菌！

Elaine韩

回复 zerollx 的帖子3 |- g, ]0 t9 g  S( N) q
6 K) S0 U, I4 o) q8 t
你好！我想问一下，你们用的sigma的MMC浓度是10ug/ml 吗？
; [5 O6 Y$ n  v/ B2 h" Q我们买的是浙江海正药业的MMC，用10ug/ml浓度效果很好！

dongxin

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* S1 t3 w+ {8 y: L8 R4 Z- m( y( n  W2 o1 {( n
对于第三个问题，我做过35mm的皿（MEF）中加入1ml含有bFGF的培养液（针对于你要养的细胞的培液），此外MEF为5×10^6。供参考，祝好运！8 Q4 Z4 }3 Z. o) X/ f5 G
: Z- p, L2 J; Q
补充内容 (2011-8-30 08:48):- D: {! E- X  k, i% P0 k2 F% Q
在向皿中加含有bFGF的培养液之前一定要用PBS洗2-3次，以去除MEF中的血清和死细胞！

hygene

回复 wangyimei 的帖子1 I1 A8 d( W7 k% ~1 l

6 m% R* |6 h5 ]6 q' R1. 直接用DMEM配成工作浓度，分装（1支5ml左右，1瓶的用量），-20°冻存，使用前根据需要量解冻。
  G( \: L( {! L" T1 `2. 一般10微克/ml的浓度处理3-4h，关于细胞增殖可以有很多种检测方法。ICR的没做过，估计就3h左右。
  w8 B* f! d4 l/ F) |+ {; t3.配制条件培养基的上清以正常细胞量接种就可以了，只是配制的时候注意跟新鲜培养基的比例，还有上清液中残留细胞要去除干净（可以通过0.22um滤膜过滤或其它有效方法）

573639471

回复 Elaine韩 的帖子# T* l8 Z9 E' V- Z
; @! J# k: K$ F& h% [7 E
我用的sigma的 10ug/ml 你买的MMC多少钱，也是这个浓度吧?

Elaine韩

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1 x  G7 |; ^$ a* b- Y) Q$ x4 b8 ?  N8 `* O
我们的MMC #M4287价格我不清楚，实验室别人买的，一直没用。1 P* m4 w5 r: d2 K9 i* ]; `- j
我之前做的用海正的注射用的丝裂霉素效果挺好的，一直10mg大概50元左右，浓度也是用的10ug/ml，我最近查了一些资料，好像和MMC的牌子没很大关系，浓度都是10左右