关于丝裂霉素处理MEF

wangyimei

还有一个问题就是关于丝裂霉素的配制和保存的问题2 y- H' A: U+ F( @9 R- b2 k6 P' q
一 是不是得配成一定浓度的储存液啊，配完之后是避光四度保存吗，还是-20度保存，看说明书都是四度保存的，四度要是保存时间长了，是不是也会有降解？
- f+ s0 Z& Y: R4 }5 V$ r5 L二是 我用10微克/ml的浓度处理3-4hours后，怎么看其是否还在增殖，只是用眼睛大概看一下细胞是否变密了没有吗？是否用做生长曲线来摸一下丝裂霉素C的浓度和时间？要是处理ICR MEF的话直接用文献上的浓度和时间是否可以，大家一般都是用的什么浓度和时间的？
7 a8 l+ F' _+ R" {三是 要是每次收集10ml的MEF-conditioned medium,一般是种多少细胞收集10ml的条件陪养液啊？

zerollx

1、用DMEM 配成储存液、分装小管、-20度保存。用的时候取储存液用DMEM稀释至工作浓度，避光4度保存，最好在短期内用完。
6 v: I! d- g) G4 ?6 I: |2、一般10微克/ml的浓度处理2个半小时就可以了，刚做的时候不放心的话你可以处理后接种到皿后，观察几天其不增殖基本上就可以确定了，没有必要做生长曲线，当然若是在不放心的话可以做个曲线。一般这个条件基本上是不会有问题的。& H/ E" ~8 M% `4 Z+ E1 {5 H
    第三个问题我没做过，就回答不了了，但你若是收集MEF-conditioned medium，有一个很重要的一点是丝裂霉素处理后一定要洗干净，否则残留的丝裂霉素对ESC是有害的。

wangyimei

恩，谢谢你的指导和解答，还有一个问题就是：丝裂霉素C处理后，用PBS洗5遍之后，是直接将ips细胞接种到上面，还是说将处理后的MEF用胰蛋白酶消化下来再以一定的密度接种到平皿中，待其融合至合适的密度后再将转导后的细胞接种其上？

zerollx

都行，也可以一次用MMC处理很多的MEF后，冻起来，用的时候再接种合适的密度，待其贴壁后直接用，不过处理的MEF是有最佳使用时间的，最好在5天内使用。

wangyimei

恩，好的

你好好

大家都是买的哪家公司的？
8 |3 K" G) H/ u+ _1 g8 N  H- v- ^查到有SIGMA的，有两种，M4287和M0353
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# y% ~4 \* B* [4 ^, B, S* D% T大家都用那个货号？( i1 u  @& X2 [( M2 m' |3 N
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wangyimei

之前我用的是SIGMA的，价钱昂贵，而且丝裂霉素最好是现用现配，对光也比较敏感，配完后要赶快用完；1 V  e4 h) k; q' M: P" o! ]
现在用的基本上都是从医院买的，几十块钱，用着还行

573639471

你好好 发表于 2011-3-10 15:01
1 A# t: N! ]4 e大家都是买的哪家公司的？3 b; C, m" ?, ]% e. O( {
查到有SIGMA的，有两种，M4287和M0353

: U% @' T1 H+ I1 ]
你好，你最终订的哪种啊，我现在订了M4287，以后多多交流吧

zsycgz

我们用医院购买的，我们医院的2mg一支的，9.75元一支，不贵。今天刚买完。没必要这个也用sigma的吧？当然科研“富二代”例外。。。:D; n3 ?. ^8 O1 \1 j. l9 B; r/ t
0 V5 ~9 ]5 g$ W, m3 m' O. R5 v
补充内容 (2011-4-15 16:32):% u  R% M6 C+ o: l& o. c  k9 j
以前也一直用，效果可以啊

573639471

zsycgz 发表于 2011-4-15 16:31
) \  N7 ~6 K6 @5 i2 N1 S7 O0 ~我们用医院购买的，我们医院的2mg一支的，9.75元一支，不贵。今天刚买完。没必要这个也用sigma的吧？当然科 ...

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我正打算从医院买，医院卖的只有一种还是有不同的标准，如果有不同的型号的，要选择哪种呢？