与骨髓干细胞的PK，脐血干细胞又赢了~~

deron

主题：低表达CD34+CD38-的脐带血造血干细胞体外T淋巴细胞分化潜能高于骨髓造血干细胞低表达CD34+CD38-的脐带血造血干细胞体外T淋巴细胞分化潜能高于骨髓造血干细胞; A/ q+ j; _8 E# u6 x6 m
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说明：原文来源自Haematologica. 2011 Feb 17，由干细胞之家新闻小组成员deron翻译（转帖请注明）。这是一篇实验性的paper" Y  k$ n4 \% E8 M" P+ q, Z

0 o0 ]" E: b  @( u  A: D翻译内容：
1 y8 b5 D& c  D1 z2 e$ D* }+ J背景：人类骨髓和脐带血是（同种）异基因造血干细胞移植的来源，这种干细胞移植疗法可治疗多种疾病并且担负着恢复T细胞的重任。受者移植后T细胞重构建的观察研究显示来源于脐血造血干细胞的T细胞更具重构建能力。这项研究着眼于脐血和骨髓造血干细胞在体外生成T细胞的能力对比。2 ^1 p+ L" E  h2 \" M
设计方法：造血干细胞在OP9-Deltalike-1 和OP9-绿色荧光蛋白共培养物中培养用以分别评估T细胞和骨髓的生成能力。T系或者骨髓分化的表面标记通过流式细胞计数检测并用于分析培养期间的功能动态。造血干细胞用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记并在培养后分析跟踪后续几代的表型情况。混合OP9-Deltalike-1共培养组用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记骨髓和未标记的脐血造血干细胞，或者用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记的脐血造血干细胞和未标记的骨髓，来评估它们在T系分化中的相互影响。造血干细胞的T细胞潜能通过有限稀释分析来量化处理（有限稀释分析:应用波松分布来估计一群细胞中具有特定的特异性和功能的反应细胞的频率的方法）。# I- Q* z7 M* [5 ^. c8 ?
结果：批量培养显示脐血造血干细胞向T细胞的分化更快且更全面。更重要的是，基于CD34和CD7的协调表达，脐带血和骨髓造血干细胞的T淋巴细胞分化能力可以在早期分辨出来。脐血造血干细胞和骨髓造血干细胞的混合实验显示这些差异为细胞内源性的。量化克隆分析证明低表达CD34+CD38-的脐血造血干细胞的T系分化能力是骨髓造血干细胞的两倍，然而骨髓分化能力两者是相近的。
* z" y* Y* Z5 C" e0 N9 d8 r结论：我们的数据表明脐血造血干细胞比骨髓造血干细胞具有更高的T淋巴细胞分化潜能且这是一种细胞自主性能力。
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+ |8 F7 S* k0 x& ?6 w- J原摘要2 b" V9 d# u! ?
Background——Human bone marrow and umbilical cord blood are sources for allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, which is a life saving treatment in a variety of diseases but is burdened by delayed T-cell restoration. Observational studies evaluating the T cell reconstitution in post-transplant recipients argue for a more effective T cell reconstitution capacity of cord blood hematopoietic stem cells. This study focuses on the comparison of the capacity of cord blood and bone marrow hematopoietic stem cells to generate T cells in vitro
7 y  D/ X: W: }* c& YDesign and methods——Hematopoietic stem cells were cultured in OP9-Deltalike-1 and OP9-green fluorescent protein cocultures to estimate T and myeloid generation capacity, respectively. Phenotypic markers of T-lineage or myeloid differentiation were measured by flow cytometry and used to analyze their kinetics in function of culture time. Hematopoietic stem cells were labeled with carboxyfluorescein diacetate succinamidyl ester and analyzed after culture to track their phenotypic progression in the consecutive generations. Mixed OP9-Deltalike-1 cocultures were done with either carboxyfluorescein diacetate succinamidyl ester -labeled bone marrow and unlabeled cord blood hematopoietic stem cells, or vice versa, to evaluate their mutual influence on T lineage differentiation. The T cell potential of hematopoietic stem cells was addressed quantitatively by limiting dilution analysis./ z- K/ ^- s2 C( T3 v/ L
Results——Bulk cultures showed faster and more extensive T cell differentiation by cord blood hematopoietic stem cells. Furthermore, the T lymphoid differentiation capacity of cord blood and blood marrow hematopoietic stem cells can be discriminated very early based on the coordinated expression of CD34 and CD7. Mixing experiments with cord blood hematopoietic stem cells and bone marrow hematopoietic stem cells showed that these differences are cell intrinsic. Quantitative clonal analyses demonstrated that CD34+CD38-/lo hematopoietic stem cells from cord blood contained a two-fold higher T-lineage generation capacity than CD34+CD38-/lo bone marrow hematopoietic stem cells, whereas the myeloid differentiation was similar.
! R' r4 S' f! |) r. o' l& f. }Conclusions——Our data shows that cord blood hematopoietic stem cells have higher T lymphoid differentiation potential than bone marrow hematopoietic stem cells and that this property is cell autonomous.. E* n( u' j) ~+ x8 X9 U* `) E

, J9 s4 H% T( [6 `原文：  
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实验步骤简介：. g* j7 a) i8 `# ^% r7 A! T# t
CFSE（羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂）标记技术是近年发现的一种先进的活细胞标记技术。CFSE作为一种可穿透细胞膜的荧光染料,具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羧基荧光素二醋酸盐基团,是一种良好的活细胞标记物。
- ~" c9 l# F( W) m- z两种细胞共培养的操作步骤保证了完全一致的外部条件，而作者用CFSE标记其中的一类细胞，之后用有限稀释分析来量化处理结果得到结论。这是一个可以借鉴的实验思路，不必消除外部影响因素。: }* k# s$ Z; @% \. ^# I) U
CFSE标记处理步骤——作者用PBS+0.1%FBS+5uMCFSE，37摄氏度4min后，加入冷的含30%FBS的PBS中和，细胞冲洗三遍，在培养基中过夜孵育去除残余CFSE  X4 V' X; u9 _: D0 J) g$ m7 d

心醉夕阳1

是否可以作为支持  脐血干细胞移植好于  骨髓干细胞移植的证据

tpwang

6 j  y% Y% t+ Y; L

! ^1 p8 _0 [( }" ?1 y4 }5 m( h8 N回复 deron 的帖子
* u4 p$ _$ q+ ^) E: p  t
$ c* U6 g  U( A$ B背景：人类骨髓和脐带血是（同种）异基因造血干细胞移植的来源，这种干细胞移植疗法可治疗多种疾病并且担负着恢复T细胞的重任。
. Z* E6 c5 `* c7 O  FBackground——Human bone marrow and umbilical cord blood are sources for allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, which is a life saving treatment in a variety of diseases but is burdened by delayed T-cell restoration. 0 c1 G" v$ H/ D, Y% X
“is burdened”意思是“……虽然在很多疾病中承担着挽救生命的作用，但一直为其延迟的T细胞重建问题所困扰。"But"在这里是转折的意思，所以后面的并列句子一般是与前面的半句相反的意思。也正因为如此，本研究的目的是要分辨出哪种来源生成T细胞能力更强，以便能指导以后的移植提高T细胞重建的效率。) N3 W  k8 O7 X2 k7 J: X+ b4 U7 t5 }
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受者移植后T细胞重构建的观察研究显示来源于脐血造血干细胞的T细胞更具重构建能力。
4 M% v5 K+ _  C  f# @Observational studies evaluating the T cell reconstitution in post-transplant recipients argue for a more effective T cell reconstitution capacity of cord blood hematopoietic stem cells.   X7 r# m, X$ a+ @3 D
移植后T细胞重建的（临床）“观察似乎倾向于认为”，argue for的意思是“为……辩护”、“赞同……”，是一种由观察得来的（相对主观的未经确证的）看法。因此，本研究才要用体外培养的量化方法来证实这一点。从而证明这种看法是正确的（或不正确的）
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量化克隆分析证明低表达CD34+CD38-的脐血造血干细胞的T系分化能力是骨髓造血干细胞的两倍，然而骨髓分化能力两者是相近的。
! a- u- M, n! j/ b& A2 u  NQuantitative clonal analyses demonstrated that CD34+CD38-/lo hematopoietic stem cells from cord blood contained a two-fold higher T-lineage generation capacity than CD34+CD38-/lo bone marrow hematopoietic stem cells, whereas the myeloid differentiation was similar.+ C; U( O: c  K0 ^6 T
直译为“脐带血造血干细胞具有高于骨髓造血干细胞两倍的T细胞系分化能力”更准确。可参考原文（Importantly, the frequency was twice as high in CB as compared to BM HSCs when the potential to differentiate into CD5+CD7+ early T cells was evaluated, and this increased to a 3-fold difference when CD5+CD7+CD1+CD4+ committed T-lineage precursors were scored at a later stage of differentiation.）

deron

回复 心醉夕阳1 的帖子# S1 H" d( P% \" |& b: t

- y4 }* w4 z% ~7 k) c2 E从分化潜能角度上，可以；
& }( c, o. I, y6 ?* J7 F# S- l但是如果是自体骨髓与公用库的脐血对比，HLA虽然不是大问题，但也是不容忽视的一面。
% Y$ P& ^% R" F4 ]9 K另外费用方面，想必脐血移植要高于自体骨髓移植。

deron

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6 o! h- {$ G: Y7 F
  M: A; z3 \& ^! f五体投地
* b; V  i0 v( S4 Y' G3 B另外想请教一下，cell intrinsic是怎么个情况，应当如何翻译？
7 H. p* d# {6 Y1 ]
0 q7 t8 {0 Q; n( t背景：人类骨髓和脐带血是（同种）异基因造血干细胞移植的来源，这种干细胞移植疗法虽然在很多疾病中承担着挽救生命的作用，但一直为其延迟的T细胞重建问题所困扰。受者移植后T细胞重构建的观察似乎倾向于认为来源于脐血造血干细胞的T细胞更具重构建能力。这项研究着眼于脐血和骨髓造血干细胞在体外生成T细胞的能力对比。5 ]0 w/ A" ]& r
设计方法：造血干细胞在OP9-Deltalike-1 和OP9-绿色荧光蛋白共培养物中培养用以分别评估T细胞和骨髓的生成能力。T系或者骨髓分化的表面标记通过流式细胞计数检测并用于分析培养期间的功能动态。造血干细胞用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记并在培养后分析跟踪后续几代的表型情况。混合OP9-Deltalike-1共培养组用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记骨髓和未标记的脐血造血干细胞，或者用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记的脐血造血干细胞和未标记的骨髓，来评估它们在T系分化中的相互影响。造血干细胞的T细胞潜能通过有限稀释分析来量化处理（有限稀释分析:应用波松分布来估计一群细胞中具有特定的特异性和功能的反应细胞的频率的方法）。2 p& _- r, k6 u% E1 y7 v+ v' p9 o
结果：批量培养显示脐血造血干细胞向T细胞的分化更快且更全面。更重要的是，基于CD34和CD7的协调表达，脐带血和骨髓造血干细胞的T淋巴细胞分化能力可以在早期分辨出来。脐血造血干细胞和骨髓造血干细胞的混合实验显示这些差异为细胞内源性的。量化克隆分析证明低表达CD34+CD38-的脐带血造血干细胞具有高于骨髓造血干细胞两倍的T细胞系分化能力，然而骨髓分化能力两者是相近的。- E0 P8 \& S6 |/ M) ]$ w  J
结论：我们的数据表明脐血造血干细胞比骨髓造血干细胞具有更高的T淋巴细胞分化潜能且这是一种细胞自主性能力。
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tpwang

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“cell intrinsic是怎么个情况，应当如何翻译？”# N- i% O' m0 O5 Y) x

9 m1 h5 m$ U! Q; `0 O5 v根据文章，Cell intrinsic和cell autonomous，细胞内在的（品质）和细胞自主的（行为）这两个词在本研究中属于同义或近义词，应该是指所观察到的脐带血造血干细胞比骨髓造血干细胞产生T细胞系的能力强这一现象，不是其他因素引起的现象，而是这两种干细胞分化为T细胞系能力的原本差异所致。证明这一点，需要排除可能的其他干扰因素如：non cell-autonomous phenomena, including differential production of cytokines or other soluble factors, or the emergence of a subpopulation of cells that negatively or positively influences the differentiation into T cells，比如所谓subpopulations of cells包括骨髓干细胞平行分化为骨髓以及免疫细胞，所以需要排除这种平行分化对T细胞系分化能力的负面影响。研究所采用的方法是混合培养条件下细胞系示踪，把标记的脐带血造血干和骨髓造血干分别与未标记的骨髓和脐带血混合培养，没有发现各自分化能力的变化。所以，排除了其他因素的影响，证明了两种来源造血干的T细胞分化能力差异是各自的内在品质和自主表现。( Q8 v( n2 f, ^* `! ~6 @1 R0 I
% W1 s& n# g5 j
其实这个研究的结论是脐带血比骨髓里含有更多偏向于淋巴系分化的造血干，可以研发marker来鉴别这种倾向，这对临床是有意义的。另外，作者认为应该寻找骨髓造血干所表现出的T细胞系早期分化缺陷的分子机制，以改善临床目前的骨髓移植再造免疫系统的效果。似乎不是完全倾向于采用脐带血来源造血干取代骨髓来源造血干。
& Q4 W) m. E, K3 I7 W* E, W! y) n- ?1 A& I+ p# e
这个体外实验结果在体内是否能hold on，是否也有待研究。- g9 x& M( Q& Z

- a1 G. L1 {! F/ Z理解不一定准确，仅供参考。

心醉夕阳1

1、人类骨髓和脐带血是（同种）异基因造血干细胞移植的来源+ z0 w+ r8 f* w7 D2 s
       骨髓干细胞移植中年龄段对细胞分化的影响还不明确，其中的免疫耐受也是存在的。我们在客人应用的同时都是应用前后打破客人的免疫耐受，改变其稳态。但目前还没有实证的东西。
; S3 h& L- u0 Z- x+ ~. i! s2、受者移植后T细胞重构建的观察似乎倾向于认为来源于脐血造血干细胞的T细胞更具重构建能力。
0 D( {) y! f( Z2 T# A' H6 J- d# c) U       脐血干细胞的异基因性恰恰是影响免疫。从时间段也是更具分化潜能的；# S5 J8 z# {8 S) W1 p5 O" L

; ~% r. Q3 ], [/ g( `纵观：还是基因与免疫稳态；分化潜能还是具有时间段的。