脂质体转染mRNA

sycdegcb

用脂质体2000转染mRNA的话，比如mvh的mRNA，mRNA会分解吗，有什么注意的地方呢，请前辈们指导下

amosummer

降解应该会有的吧，注意些可以降低降解的量，要么加些修饰，可以防止降解。mRNA没做过，但miRNA是做过，要先构建载体的，可以在细胞内稳定表达，不会降解。不知道你们能否可以先逆转录成cDNA再进行转染，这样降解应该就会减少很多吧！

sycdegcb

回复 amosummer 的帖子( ~2 _5 q4 I* w% k  W5 }; f$ l

; }, S: I0 Z8 E" n0 b谢谢你，我是想如果转染mRNA的话，可以达到瞬时转染，研究这个基因瞬时过表达的影响，如果是DNA的话会持续表达吧

regene

只要质粒不整合入染色体，也是瞬时过表吧

sycdegcb

回复 regene 的帖子; p( k8 A, X+ j) @4 e  ~: K
; P6 e4 k3 @: }7 X
谢谢！

franklinhg

可行性值得考虑  

xiangchou812

为什么只要瞬时过表达呢？怕整合到染色体的话可以用腺病毒载体。转染mRNA没做过，不过我记得脂质体2000说明书上有详细介绍吧？照着做应该没有问题。注意问题肯定跟你制备mRNA一样，就是防降解。

Donnies

在转染的时候采用无RNA酶的EP管和枪头可以防止mRNA的讲解。这些EP管和枪头都是一次性的，另外做实验之前一定要无菌。