ips细胞几天换液好，培养30代需要多长时间，谢谢！

yangpan521

各位能把IPS细胞图片发过来看一下吗？我有羊的集落细胞，但不敢确定是不是ＩＰＳ。

yangpan521

还有向楼上那位说的，培养液中加了LIF后，ＩＰＳ细胞分化的几率有多大？请指教) D3 m2 E, ~8 Z7 ~' M" m- a) j

docqbzcn

回复 573639471 的帖子7 m! W3 t6 c- P* \

8 e9 Q! f5 a  L- a! u你好，请问你是如何鉴定的ips？常见的抗原oct4,nanog,SSEA-3,TRA-1-81抗原那个是最典型的？最早出现的啊？谢谢

nculsa747

回复 573639471 的帖子: A5 o% M9 i# `6 q
+ o. H4 W1 D8 X) b4 Z* M$ G  P
10的6次就行了

573639471

回复 docqbzcn 的帖子
6 d7 X( m- h8 W# V0 C* Z7 K
( N) w' B$ B: S7 q. g4 _胚胎干细胞全能性的鉴定主要包括以下几个方面：
% O, H7 t5 ?) F6 z9 b  O        碱性磷酸酶活性检测( ^# r0 D- x  K; V3 o  r/ t1 A  s
        干细胞表面marker的免疫染色检测- `( a8 [5 ?$ s  Q( q
        干性因子的去甲基化分析
: u9 X! B. o0 ]! |4 R        干细胞内源基因的表达分析
1 D# Y$ b# _' i/ H8 C* V- {$ s! f        端粒酶活性检测
6 {& H7 h; f$ ]8 i# {; }) i        核型检测
  Q" V% J$ G% `: ~% O* p! |2 b        拟胚体形成
6 v6 |5 V* y! ~        畸胎瘤形成实验1 Q+ W/ J6 k: Y) A; F
至于表面Marker，人和鼠的ips是不同的，但是OCT4、SOX2、Nanog都是要检测的。人还要检测SSEA-3和4，TRA-1-81，TRA-1-60；鼠还要SSEA-1
/ F( C& f# o: {  B4 H

Takano

回复 573639471 的帖子" n4 M, ^' K/ R! y% ~0 v8 j

6 O6 D( c4 F2 Y" Y1 T+ p# u0 a+ _: O科普很好，赞:D

922922922

回复 manybit 的帖子; b- A9 \) v; T" m5 B+ j" B
% `' _* r; [3 m, h, F2 d0 p! U
我们的经验是如故接种密度不大，根据第二天培养液的颜色，前几天可以隔天换液，但是随着克隆增大，一般就一天换一次液了，真心觉得养这种细胞很烧钱。

葱葱

回复 manybit 的帖子' Y5 }1 ^* |2 C3 r" w$ {, J
) ^. ^7 j- O% S+ b! ~6 X
最好每天换液，人一般是3-5天一代。请问你挑克隆时用的什么方法？

葱葱

回复 922922922 的帖子7 g: A4 s, K  o9 w! f# h- |
3 ^3 ^5 o  b) M
我养的细胞出现了污染，感觉好多小虫子！是突然一夜爆发的那种！

Jonathan

鼠的ips我做的很少。对于人ips，楼主还是参考我的意见吧。看见很多人回帖，很多都不知道是不是没经验。人ips的培养基，里面有一种很重要的生长因子，是bfgf。如果是用在feeder上面的话，我们通常会加4-10ng/ml，如果是买的mTeSR1或者E8，里面的浓度应该是100ng/ml。培养基是必须天天换的，因为bfgf的稳定时间是大概18个小时。如果超过18个小时，或者隔天换液，看起来细胞可能不会有什么变化，不过仔细做一些基因表达吧，会有不同。所以每天换液是必须的。
0 z1 }3 K9 e0 V6 ]6 r, x. v
( P. A/ e/ U' y" z. u7 b% H) K第二个问题，隔多少天传一代呢。对于很多人来说，克隆不分化，还没长满就不用传的观点是不对的。如果是用matrigel或者geltrex或者vitronectin作为matrix，通常80%-90%就必须传。传代的比例根据不同干细胞系的生长特性而定，从1/10到1/20不等。这样的话，保持4天或者5天传一代对于细胞来说是最好的。如果超过5天，matrix是没法坚持那么多天的。所以即使没有满，也必须传。