ips细胞几天换液好，培养30代需要多长时间，谢谢！

yangpan521

各位能把IPS细胞图片发过来看一下吗？我有羊的集落细胞，但不敢确定是不是ＩＰＳ。

yangpan521

还有向楼上那位说的，培养液中加了LIF后，ＩＰＳ细胞分化的几率有多大？请指教8 I) ?$ _1 r7 y, R6 n0 z

docqbzcn

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  m: n. O# k8 \你好，请问你是如何鉴定的ips？常见的抗原oct4,nanog,SSEA-3,TRA-1-81抗原那个是最典型的？最早出现的啊？谢谢

nculsa747

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9 ~: n( B+ _. o% N& G) ?( I
9 r8 Z* _2 e, p% R5 A10的6次就行了

573639471

回复 docqbzcn 的帖子2 \1 ?% h' s, U1 G9 g; \7 e

$ R* X5 |1 ?* |7 k- K4 ^  ^) q7 C胚胎干细胞全能性的鉴定主要包括以下几个方面：
( B/ C3 o3 v4 j, {        碱性磷酸酶活性检测
( |/ _( Y6 `3 I+ a1 f! W7 m. I        干细胞表面marker的免疫染色检测% f- [) @/ Q; j% r5 L; I" ]+ S
        干性因子的去甲基化分析
! `' Q1 m: U% F. E8 E, Z/ Z* R        干细胞内源基因的表达分析
1 m. N( u: |$ ?! K# e* ]$ D$ v# P        端粒酶活性检测; O/ t6 E. R0 v( G8 C7 B+ b4 t
        核型检测' {/ c( I  h) L5 o
        拟胚体形成
2 L) V+ l$ W5 e7 Z% h3 l0 T! U. c        畸胎瘤形成实验3 r. `7 X3 C2 [' m
至于表面Marker，人和鼠的ips是不同的，但是OCT4、SOX2、Nanog都是要检测的。人还要检测SSEA-3和4，TRA-1-81，TRA-1-60；鼠还要SSEA-1
$ V$ p! z" ?  b  ~( K

Takano

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6 O0 E3 N3 |. j# _
1 B6 d  U( r$ K6 ?" s3 W( X科普很好，赞:D

922922922

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9 A8 Y3 S1 s0 c8 P; |  D; w
1 o* l1 @# b$ q2 V) Z7 T  @! M我们的经验是如故接种密度不大，根据第二天培养液的颜色，前几天可以隔天换液，但是随着克隆增大，一般就一天换一次液了，真心觉得养这种细胞很烧钱。

葱葱

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' n2 }& K- F" F
( E3 p1 r% o5 N" s最好每天换液，人一般是3-5天一代。请问你挑克隆时用的什么方法？

葱葱

回复 922922922 的帖子" |1 p! g4 F9 j/ Z! [

, U: j# P5 R9 z1 A7 h" H1 o( d我养的细胞出现了污染，感觉好多小虫子！是突然一夜爆发的那种！

Jonathan

鼠的ips我做的很少。对于人ips，楼主还是参考我的意见吧。看见很多人回帖，很多都不知道是不是没经验。人ips的培养基，里面有一种很重要的生长因子，是bfgf。如果是用在feeder上面的话，我们通常会加4-10ng/ml，如果是买的mTeSR1或者E8，里面的浓度应该是100ng/ml。培养基是必须天天换的，因为bfgf的稳定时间是大概18个小时。如果超过18个小时，或者隔天换液，看起来细胞可能不会有什么变化，不过仔细做一些基因表达吧，会有不同。所以每天换液是必须的。6 S" x9 C: \- }0 e; l, J( |5 |' r

& Q; m9 J3 g" J) p( V+ n# l第二个问题，隔多少天传一代呢。对于很多人来说，克隆不分化，还没长满就不用传的观点是不对的。如果是用matrigel或者geltrex或者vitronectin作为matrix，通常80%-90%就必须传。传代的比例根据不同干细胞系的生长特性而定，从1/10到1/20不等。这样的话，保持4天或者5天传一代对于细胞来说是最好的。如果超过5天，matrix是没法坚持那么多天的。所以即使没有满，也必须传。