ips细胞几天换液好，培养30代需要多长时间，谢谢！

yangpan521

各位能把IPS细胞图片发过来看一下吗？我有羊的集落细胞，但不敢确定是不是ＩＰＳ。

yangpan521

还有向楼上那位说的，培养液中加了LIF后，ＩＰＳ细胞分化的几率有多大？请指教
: y  A% h  `! Q! O1 U

docqbzcn

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% y$ O3 j  m, h2 z* o, n- L5 i1 u. B. P. c. q" j# R/ A6 S
你好，请问你是如何鉴定的ips？常见的抗原oct4,nanog,SSEA-3,TRA-1-81抗原那个是最典型的？最早出现的啊？谢谢

nculsa747

回复 573639471 的帖子+ }8 h4 {: d8 K: D
# v6 F$ N: l. [% n" F9 D
10的6次就行了

573639471

回复 docqbzcn 的帖子
1 S! I1 y* ~+ j! y0 p* w! w
, ]' W3 }6 F8 |: M3 h7 o胚胎干细胞全能性的鉴定主要包括以下几个方面：" K* `7 K; ~2 q# X
        碱性磷酸酶活性检测: e7 a3 v! V3 t' h1 O
        干细胞表面marker的免疫染色检测1 A9 I+ E$ r- s- ?
        干性因子的去甲基化分析
" T& M3 l5 u  m        干细胞内源基因的表达分析
- A5 Q+ ]" e4 n% {6 C) j, ]6 `        端粒酶活性检测& c* T9 M  Z+ e* T7 ]
        核型检测
- \* f7 i9 }: u" T5 N( M        拟胚体形成
1 Q* f, u2 C- R; P3 o        畸胎瘤形成实验
7 j9 I2 r2 w) B- C至于表面Marker，人和鼠的ips是不同的，但是OCT4、SOX2、Nanog都是要检测的。人还要检测SSEA-3和4，TRA-1-81，TRA-1-60；鼠还要SSEA-1
/ [; I; i0 C" T% e" |

Takano

回复 573639471 的帖子2 T1 ^5 R4 {1 b+ {. D5 m" `* \: j
; g, l" f9 P1 A; G5 r
科普很好，赞:D

922922922

回复 manybit 的帖子( V: f/ p4 R8 u" G" e; r
# q$ L' |4 w0 d& k+ L/ G5 c+ T
我们的经验是如故接种密度不大，根据第二天培养液的颜色，前几天可以隔天换液，但是随着克隆增大，一般就一天换一次液了，真心觉得养这种细胞很烧钱。

葱葱

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6 g1 l* |: d; e# M
+ m# D4 x( B1 G% x3 v. o9 }1 D. J最好每天换液，人一般是3-5天一代。请问你挑克隆时用的什么方法？

葱葱

回复 922922922 的帖子7 {$ v* d# L) w$ K% a

, U, x* Q! z5 A我养的细胞出现了污染，感觉好多小虫子！是突然一夜爆发的那种！

Jonathan

鼠的ips我做的很少。对于人ips，楼主还是参考我的意见吧。看见很多人回帖，很多都不知道是不是没经验。人ips的培养基，里面有一种很重要的生长因子，是bfgf。如果是用在feeder上面的话，我们通常会加4-10ng/ml，如果是买的mTeSR1或者E8，里面的浓度应该是100ng/ml。培养基是必须天天换的，因为bfgf的稳定时间是大概18个小时。如果超过18个小时，或者隔天换液，看起来细胞可能不会有什么变化，不过仔细做一些基因表达吧，会有不同。所以每天换液是必须的。
4 t7 F) `. W; W8 w( ^' x
; N. V! \; B4 F$ L$ l第二个问题，隔多少天传一代呢。对于很多人来说，克隆不分化，还没长满就不用传的观点是不对的。如果是用matrigel或者geltrex或者vitronectin作为matrix，通常80%-90%就必须传。传代的比例根据不同干细胞系的生长特性而定，从1/10到1/20不等。这样的话，保持4天或者5天传一代对于细胞来说是最好的。如果超过5天，matrix是没法坚持那么多天的。所以即使没有满，也必须传。