求教：如何提高脂质体lipofectamine TM 2000的转染效率

mckf111

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什么细胞啊 这么高的效率。。

crystal

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# c7 b1 n. I6 N+ D9 P- d! ^5 u" ?1 |! F0 R
hela细胞，很好做的一个细胞株！

runsong

你为啥要用IRES载体，这种载体的GFP表达效率不高，而且转染两三天后可能会莫名其妙地失活。建议你用EGFP-C1做对照，再看看筛选效率如何。5 }* Z) `2 l9 u+ x
转染其实没啥技巧，我感觉对于转染效率，脂质体质量、细胞种类状态、操作水平各占45%、45%、10%的权重。$ i3 ?# j, h" x! f3 C
脂质体假货很多，三支中可能只有一支给力。呵呵，买试剂的都是奸商。

xvmengdi

我是一名新手，刚刚开始做转染实验，我想请教一个问题，用脂质体转染细胞后，细胞内会有黑点，我上网查呃一下，属于正常情况，可是转染24小时后细胞变成贴壁的粒状物质，想不明白这样的细胞还可以做荧光素酶报告基因实验吗？非常感谢~

细胞海洋

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runsong

回复 xvmengdi 的帖子1 b- H# s9 {, R  s& Y4 e  v9 Q

/ ^, H. n$ D% X; y7 q4 ?% A+ m$ U, c细胞是不是死了，是不是用了假的脂质体

王乾

转染的效率根本上还是由细胞种类决定的，有些细胞系好转，效率高，有些就不怎么好了。但是我们还是可以尽可能的提高转染效率，上面的战友讲过，细胞生长状态要好，这个很重要。另外，每种细胞系都有自己的最好用的转染试剂，要多看文献知道这种细胞系用哪种转染试剂最多。然后自己可以按照DNA和转染试剂的比例做个曲线，看看reporter的表达效率，做到最好的转染效率。其实DNA的质量也很重要，不仅仅是内毒素影响细胞的生存，一般情况下DNA超螺旋最好比列越高越好。为了促进表达，转染前线性化也可以（可能是这样，没有这么做过）。
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) f0 @9 U: w1 q: n  l& Y, N如果有些细胞系确实难转，就应该考虑其他方法了，电穿，病毒之类的。amaxa的nucleofector可以直接把质粒打到核里，很好用。
2 Y) M. P7 W; N; a/ g! p1 \) |" u

双刀

细胞数少点对于转染效率的影响怎么样？

bllx58

建议把G418的浓度降低来进行压力筛选，然后梯度提高，这样效果很好，至少自己试感觉不错，相当于是一个梯度筛选，逐步筛选的过程

huangcong1988

提高转染效率可以从两个方面着手，一个是要转的细胞的状态，细胞一定要吹打均匀了，而且在接种的时候一定要使得细胞密度比较适宜，另一个就是质粒的质量，这个在提取质粒的时候选择好的试剂盒（或者说好的提取方法）一定要考虑清楚