冻存Balb/c小鼠骨髓间充质干细胞 - 间充质干细胞专区干细胞之家



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若兰汀

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楼主

发表于 2011-3-10 11:09 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

请教养细胞的同学们，冻存Balb/c小鼠骨髓间充质干细胞的冻存液中血清的浓度时多少？冻存时需要在冰上进行吗？现在市面有售一步冻存液不知哪位用过，效果怎样啊？谢谢

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沙发

发表于 2011-3-10 19:56 |只看该作者

基础培养基+血清10%+DMSO10%就可以了，我没用过成品的冻存液，不知道好不好。冻存的操作不必冰上操作，正常的去做就是了。基本上都是慢冻，4度半小时，-20度两到四小时，-80度过夜然后沉到液氮之中。也有用包布包好了直接放到-20度，然后-80度，沉液氮的

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husanqiang

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藤椅

发表于 2011-3-11 11:06 |只看该作者

我们实验室冻存方法是90%小牛血清+10%DMSO。慢冻，4度半小时，-20度两小时，用冰盒移入-70度冰箱即可。我们用此法效果很好。

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金戈

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板凳

发表于 2011-3-11 23:05 |只看该作者

没有必要血清加那么浓，有点浪费。血清浓度高，细胞活率是会好些，但是细胞老化快。

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nculsa747

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报纸

发表于 2011-3-12 00:04 |只看该作者

hESC冻存时用90%KSR+10%DMSO。而非ESC，一般复苏成活率都比较高。可以用DMSO:FBS:MEDIA=1:3:10，也可以用10% DMSO+90%MEDIA，我冻存MEF时是用的后者，前者和后者复苏效率差别不大。既然是有干性，可以考虑用前者。现在还没商品化的冻存液，至少我不知道，cyagen说他们有自制的冻存液，平时常温保存即可，用时直接用它重悬即可，但对于ESC，还是没有办法，复苏效率依旧很低。