用RNA裂解液裂解过的细胞，还可以用来提DNA吗？

lorey

样品比较珍贵，之前想着提RNA，后来又想提DNA了。但是样品被RNA裂解液处理过了，再提DNA还可以吗？

fresher

yes, actually,still some dan left if you use trizol

amigel

当然可以,照Trizol说明书上做就可以了,如果你用的不是TRizol而是国产RNA裂解液,一样用

tangyvhuang

没问题的，

jiaqing

trizol法同时提取RNA/DNA：方法如下6 H* Z' y/ _- j5 J$ B( h
先提取RNA8 e7 v( V( o( x( r8 ?9 C
每使用1ml Trizol加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈震荡15s，室温放置3min。& E% Z; F: \. X# W0 D# c2 x. B
        如不能涡旋混匀，可手动颠倒混匀2min代替。
4 [) ~+ m0 u+ c6 n' E1.   4 ℃ 10 000rpm离心10-15min，样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和上层无色的水相，RNA主要在水相中，把水相（约600ul，约为所用Trizol试剂的60%）转移到新管中。（如要分离蛋白质和DNA，可保留黄色的有机相）
0 b7 `* r( p0 d; u2. 在得到的水相溶液中加入等体积的异丙醇，混匀，-20℃ 放置20-30min。' f) \" V- ?$ b
        植物或动物组织RNA提取中，容易沉淀出大量的蛋白等污染物，导致电泳检测时看不到RNA。可以按以下步骤操作减轻污染：在上清中加入1/2体积的异丙醇，1/2体积的RNA助沉剂，然后进行以下操作。
9 x  d# j' e$ t  V2 B3. 4 ℃ 10 000rpm离心10min，去上清。
) s" M) R# g% }2 z9 u2 [7 y/ S$ ?. E     离心前RNA沉淀经常是看不见的，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。/ @4 W% f7 t+ R9 n' P% }- ~
4. 加入1ml 75%乙醇（DEPC水处理过的水配制）洗涤沉淀。每使用1ml Trizol至少加1ml乙醇。) J# }6 d% {+ U' s& m; A
5. 4 ℃ 10 000rpm离心2min，弃上清；短暂快速离心，用移液器小心吸弃上清，注意不要吸弃沉淀。4 L3 g# S+ e( J1 t- ^9 @
6. 室温放置晾干（不要晾得过干，RNA完全干燥后会很难溶解，大约晾干2-3min左右即可）。加入适量DEPC水（根据实验需要，可加30-100ul水）或0.5%SDS，用枪头吸打几次，充分溶解RNA。如RNA用于酶切反应，勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅ 的去离子甲酰胺溶解，-70℃保存。
: b4 N1 b3 P: ^2 A. R7 l) ]+ y0 u/ b: @( f0 H* l
DNA的分离
4 |. r' P5 Y' ]! `准备试剂：乙醇，0.1M柠檬酸钠（含10%乙醇），75%乙醇，8mM NaOH
8 I0 S  Y3 L7 ^( ?5 H操作步骤：# L$ f+ F9 {) V" E  T4 F
1. 样品加氯仿分层后，移去上层水相，用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。每使用1ml TRIzol加0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3min，2～8℃不超过2000×g离心5分钟。 " {" B/ i/ l  N& T( Y2 z
2. 移去上清，（如需分离蛋白质，可保留）用含10%乙醇的0.1M柠檬酸钠洗涤DNA沉淀。每1ml TRIzol加入1ml柠檬酸钠，室温放置30min，2~8℃2000×g离心5min，弃上清，重复一次。 ; W! c  J5 C3 S9 y) H* i5 R' ?
3. 用75%乙醇再洗一遍DNA沉淀，每用1ml TRIzol加入1.5～2 ml75%乙醇，室温放置10～20min（不时颠倒混合）2～8℃2000×g离心5分钟， 弃上清。 : l6 N( w. m* j, F
4. 室温放置晾干DNA 5～15分钟，用8mM NaOH溶解DNA。
' t8 g; ~0 ~* P, [' ]           从50～70mg组织或107细胞中分离的DNA溶于300～600μl 8mM NaOH，DNA的浓度通常为0.2～0.3μg/μl。提取的DNA沉淀不易溶于水和Tris缓冲液中，建议用弱碱溶解，8mM NaOH的pH值为9，溶解DNA后可用TE，HEPES调节pH。从某些样品（尤其是组织）中提取的DNA中可能包含一些胶状不溶物可>12000×g离心10分钟除去。
7 O2 k6 y  `) m( QDNA的定量：* H6 b) q, x& A
        取一份溶于8mM NaOH的DNA加水测A260值。一单位A260值相当于50μg/ml双链DNA。根据DNA产量可估计细胞数，人、大鼠、小鼠1×106二倍体细胞含DNA的量分别为7.1μg，6.5μg，5.8μg。& H' ^/ ~4 y) r' V& @5 e