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mckf111

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楼主

发表于 2011-3-20 16:51 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

本帖最后由 mckf111 于 2011-3-20 17:01 编辑 1 I8 Q9 ~: m+ P; X

构建RNAi质粒必须要用pSUPER系列吗我手头上的pIRES2-EGFP载体能用么4 q! I1 \, h* _5 l2 F9 x7 F
或者说要表达shRNA的质粒有什么特殊要求吗

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mckf111

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沙发

发表于 2011-3-25 15:49 |只看该作者

有人知道否？

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amigel

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藤椅

发表于 2011-3-25 17:00 |只看该作者

本帖最后由 amigel 于 2011-3-25 17:12 编辑
& q; p7 m: w' Y
现在表达shRNA多用pol III依赖型的启动子如U6/H1驱动载体,常见的有pSUPER和pSilencer系列,国产的也有,它们的优点是1.表达广谱；2.终止位点明确，遇到4个连续的T终止转录.除此之外还有II型启动子启动的shRNA表达载体，如CMV启动的pSilencer4.1.现在的最新的shRNA表达载体考虑了miRNA的结构特点尤其是左右翼序列，因而相对与普通的shRNA载体，更易形成成熟的siRNA.但好象现在用得比较多的还是U6/H1驱动载体,pIRES2-EGFP载体似没看到有人用来表达shRNA,可能是启动子或转录终止信号不适合,你拿它换个最常见的U6/H1载体不就得了.