请教干细胞流式细胞术抗体问题

蛮蛮1984

各位高手，我们的干细胞要送出去测定，所以跟流式细胞测定有关的一位问题我还不太清楚。* q; w* }+ T1 U( O, @* D
请问，测定干细胞的抗体需要荧光么，还是抗体本来就带有荧光。% I, ?2 w8 F( w8 V; |( `
      测定时抗体的量是加多少呢。% h; v0 I' i) h* i$ [" o
      测定之前干细胞需要做什么处理呢4 L! _, D: X- Y6 A4 `& b7 j5 |. e
      干细胞应该怎么送过去呢，是加了抗体送呢，还是送过去再加呢

aminhair

第一、你是送到专业单位去检测还是，自己学校的其他人帮你做？   这些问题其实应该问对方不是最清楚的嘛？1 f4 J: z  \) S- B
第二、干细胞测定中有些用荧光有些用化学显色。但是流式中应用的是带荧光激发标记的。由于流式细胞仪种类不同能检测的荧光素也不同。所以请咨询对方。其他人无法给你回答！4 J+ R0 r) i2 r. b, }4 O5 X' d
流式一般步骤中固定——染色——检测。   所使用的抗体也有差别，即一抗，二抗——荧光基团   或  一抗——荧光基团！7 p! C) i" _# K' G# H
本人需要包包，谢谢！

sdjjfangfang

1、干细胞的测定和其他细胞的测定是一样的。如果是膜表达的蛋白，直标的流式检测抗体是最好的。如果是胞浆表达或者是核表达的，则只能用间标的抗体。直标的抗体都会自身带有荧光标记，间标的抗体所标记的荧光则由你选择的二抗决定。
3 w3 W' r& f# l2、抗体的用量与你所购买到的抗体有关，具体看说明书。
- Z+ {  |% R- P7 G3、检测之前的处理与其他细胞的流式检测处理是一样的。
% [# O$ g# v0 _4、检测时，应该是标记后的细胞。要注意避光。& ^; H3 B# C3 C/ U7 z  _6 O3 y  U3 B

sdjjfangfang

更正一下，如果是胞浆表达或者是核表达的，可以用间标的抗体也可以用指标的抗体。只是我们家间标的抗体较多。

sdjjfangfang

补充-如果是做免疫荧光实验则最好是用间标的抗体

蛮蛮1984

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CD29和CD44应该是膜表达的吧