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楼主: ada800515
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求助逆转录病毒载体共转染293T(附图)   [复制链接]

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包包
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发表于 2011-3-30 11:51 |只看该作者
不行,转染好的结果你一看就知道。就是很漂亮的那种结果。
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发表于 2011-3-30 16:36 |只看该作者
这样的转染应该不算是成功的转染。绿的细胞太少而且荧光强度较低。考虑是不是病毒有问题,包括包装的过程、病毒浓缩的过程以及最后病毒的分装储存。其次还要考虑你的包装质粒是不是有问题,是否有结构的突变。
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发表于 2011-4-1 00:14 |只看该作者
转染时,细胞的密度有60%就差不多啦,我觉得用钙转染的方法挺好的啊,荧光强,又廉价。因为这个细胞比较娇嫩,所用的培养基要预热,要不细胸会漂起,状态不好。
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发表于 2011-5-30 17:27 |只看该作者
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我用的质粒是pMIG,pUMVC和VSVG% h( `, d& I2 [* W: p5 a
$ o/ @; f0 J- A+ Z+ a
pUMVC和VSVG是辅助包装病毒的质粒吗?
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发表于 2011-5-30 20:08 |只看该作者
你的lipo2000和质粒的比例做过预实验吗?这个比例很重要,lipo2000的量多了就容易是细胞死亡,我们一般是lipo2000:质粒=2.5:1,感觉转染效果还挺好的。
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发表于 2011-6-3 17:23 |只看该作者
细胞的代数式怎样计算的?是从每次复苏开始计算还是从买来开始第一次传代开始计算?
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发表于 2011-6-24 02:17 |只看该作者
我用的是慢病毒感染的293FT,用的是lip2000+opti-mem,挺好的,因为每个人的手法都不一样,会有差异,你可以先光转个egfp的空质粒看看,如果还很弱,那就是你操作及方案错误,或者你的试剂是假货。
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发表于 2011-11-3 12:19 |只看该作者
求助逆转录载体共转染293时用的是什么转染试剂啊
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发表于 2011-11-4 01:01 |只看该作者
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金话筒 优秀会员

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发表于 2011-11-4 01:25 |只看该作者
你这个239细胞都用到17 18代了? 真是奇了, 我们一般都用6-10代的细胞,我发现10代以后转染效率大减,不知道国内的同行是不是由此体会?
0 C3 H  T4 u; d8 }+ C你这病毒肯定是不能用的,效率太低,建议看下本网站的宝宝计划里面那些图,供你参考。
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