病毒感染

guitaoips

请问大家在包装慢病毒时，收集病毒液感染293FT时可见荧光，但是将其感染体细胞ME时却没有见到荧光，病毒也加的不少（1ml左右）感染体细胞的密度有没有要求？病毒量有没有要求？

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guitaoips 发表于 2011-4-3 11:36 / y5 o: V$ _% O" P+ u
请问大家在包装慢病毒时，收集病毒液感染293FT时可见荧光，但是将其感染体细胞ME时却没有见到荧光，病毒也加 ...

  d  B9 q& D( v0 {0 s( b1 f7 N最好上图，不上图的话应该描述的再具体一点，比如你用多少的病毒去感染多少的293FT，多大的体系，感染时候培养基加了多少，最后的荧光比例是多少，先要从这个判断一下你的病毒质量，再去衡量你加1ML的病毒能否感染上体细胞ME，你可以考虑加一点POLYBRENE。

wangyimei

还有一个问题，不知道你收集好的病毒上清加到你的要转导的目的细胞中是多久才观察荧光，有的细胞不如293T细胞那样好转导，转导293T细胞时48小时就能观察的绿色荧光，有的细胞你得72小时，甚至是四五天才能看到，你可以再多观察几天

guitaoips

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  G, L1 d# @8 D% Y& O, L" ^' u我是导入MEF(小鼠成纤维细胞）的,是在72h之后观察的，之后还是没有见到荧光，不过当时的ME已经长得很满了，可以感染293FT，我的病毒也比较黄，会有问题吗？

wxyWXY

你用293包装病毒时 293细胞是绿色的 只能说明你gfp 的质粒和hbs是没问题的  + \, @$ v9 _& f1 s0 U' c3 @
病毒比较黄可能是293细胞比较多 培养液就变黄了0 x5 h( b! C  m  G" f* ]) x6 F
用包装出来后得病毒去感染mef 才能真正知道你得病毒滴度怎么样
: s9 I; Q0 I1 Y1 ?) t( E$ {. c8 a3 t我觉得你可以酶切检测下另外两个质粒有没有问题 另外控制好质粒之间得比例% L! l) A2 c0 e' a' j5 P, h
病毒包装好后 一般24小时就能看到荧光  但这时荧光强度比较弱  像楼上所说 可以加点polybrene

guitaoips

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5 T, V3 l+ T2 X( i" L
" i9 P6 _1 a! _- ^2 C  }谢谢~~~