EGM-2的神奇

新手

本人用EGM-2养大鼠外周血内皮祖细胞，操作均按照文献上做，3day-7day后，细胞一直处于刚分离出来的状态(小圆形)，细胞形态未变化，之后听取师兄建议加了20%的胎牛血清（HYclone公司），情况依然没好转，这是为什么呢？难道是细胞因子的浓度不够？
$ Z# q3 y, n) g如果用M199培养基配置完全培养液，胎牛血清，VEGF与bFGF需要加多少？（各种文献提到量都不相同）请做过这方面研究的老师们给些建议嘛！！！

redcam

我用的是DMEM，FBS浓度为10%，VEGF浓度为10ng/ml，bFGF不太常用，培养效果还可以，不妨试试。

新手

你是按照常规培养法（72h不动，3天后换液，以后每隔3天换一次液）吗？接种密度是多少呢？

almasun97184

MCDB131不错，是养内皮细胞的培养基，加血清、VEGF、牛脑萃取物就很好，养出来还很纯。
5 Z0 u+ K: _3 t0 `其实EGM2更高级呀，只是容易过期。你是用的新开瓶的EGM2么，在4度放了1个月就效果不太好了。

congchen008

EGM-2，+20%PBS+10ugVEGF+2ug bFGF，最后用FN包被有利于细胞贴壁，要注意换液时间。

mike8710

VEGF的浓度一定得是10ng/ml吗？我买的才1ng/ml影响大吗？还有我用的是鼠尾胶原包被的  这个可行吗？

parcuezhang

VEGF的浓度1ng/ml太小了，至少要到5ng/ml。

mike8710

回复 parcuezhang 的帖子" K. P; S! a8 N( Q0 E% E. \
+ U5 c6 T! P5 T( s
不好意思 这么晚才看到您的回复  麻烦问您一下  如果VEGF的浓度过低会有什么影响？我养的EPCs向脂肪细胞转化了  您觉得与VEGF的浓度偏低有关吗？您遇到过吗？   谢谢/ Q, F% A5 v2 j# W4 H2 S: o

mike8710

回复 congchen008 的帖子
8 u0 c# z. I" ?) v
& Y' D% ^1 D0 L你换液时间一般是多久啊？
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parcuezhang

你培养的是脂肪干细胞了，内皮的分化主要靠VEGF了。一般2－3天换液一次。