求端粒长度检测方法

ljj0558

我在做端粒长度的检测，有人有好的方法，能说下吗？

tigerfish

我正在做，刚刚买了Roche的TeloTAGGG Telomere length Assay.发现操作极其冗繁，正在准备中
( {. p" r. y2 |' t6 N! l# _9 M做出来了在和大家讨论。
% G% {7 ]4 Y* x6 O  }% V2 k: g: u8 T. I3 h9 L5 i
关于产品可以参见Roche官网。

yunshi503

我 正在做 用 real-time PCR方法

grape

端粒长度的测量方法：
6 _( b( m; @- M7 ^1、DNA印迹法(Southern blot, SB)/ n5 g" K+ z9 u4 E/ ~" o
2、杂交保护分析法(hybridization protection assay,HPA)
3 y9 g1 G0 D- T. Z3、荧光原位杂交(FISH)5 p4 I; N$ ^1 P% ~6 B
4、流式细胞计量-荧光原位杂交(Flow-FISH)- O0 b- S" ]9 ^% X; e
5、寡核苷酸引物原位DNA合成法(PRINS)" Q' N/ q1 q! h7 G' F! q6 C8 @
6、定量PCR
# a; O. |( e6 }, K1 S8 d7、单个端粒长度分析(STELA) 等。4 H. _% I: }8 x" G+ R+ G
/ q5 C9 C* W# s4 n* I( Z& k
总的来说,Southern blot是应用最广泛的方法, 但是针对不同的目的在测量端粒长度时还应有所选择；  ]& Z, d7 m5 z  c; v6 {
流式荧光原位杂交(flow fluorescence in situ hy—bridization，Flow—FISH)是近年来发展的检测细胞端粒长度的新方法。该方法与经典的Southern印迹、定量荧光原位杂交比较，所需样品量小、细胞数少，可用于检测不分裂细胞、高通量细胞，操作快捷、灵敏度高、特异性强、重复性好，并且可区分并分析同一份标本中的不同细胞亚群，如不同免疫表型的细胞亚群，而避免预先的细胞分选过程。/ g7 R8 i% b* e. E
% R0 e5 T" {" V$ B7 q6 H8 f5 N+ a
具体区别详见文献：6 D" v' b7 S' U7 R, ^4 ^  W

# F3 E7 G0 n; T1 p6 S! v

tigerfish

grape 发表于 2011-6-7 16:59 2 F4 i- ?; u4 g6 A8 m& d; ]
端粒长度的测量方法：/ w( O) X3 K& Q' L0 I- z
1、DNA印迹法(Southern blot, SB)
9 G% P- n3 h: B7 K1 d8 g1 m2、杂交保护分析法(hybridization protection as ...

) S+ o+ f# j# M; W
感谢

ljj0558

回复 grape 的帖子4 h  c1 Z5 A  s) ]# b. X6 m: s7 p
9 @+ B# r2 u1 O3 p  S8 _* T3 g
谢谢啦啊
, Q+ R0 H& Q# ^! {! E% K

shiyi

Telomeres and Telomerase Methods and Protocols 2nd Edi 2011,供参考
- o3 w! n3 `" [# X: _) F% v  x8 Z! A' @& }6 C

langziforever

其实大家可以关注一下目前高通量测序的方法，国外不是有人发明了一个克隆端粒的载体方法，其实克隆以后可选择的方法会有很多，而目前第三代测序方法可以实现超长度的测序，这样就可以精确的测得端粒的长度，以及重复序列单元，但面临的问题可能是生物信息学组装算法。这方面应该也可以开展一些单分子水平的检测方法！欢迎后续讨论！

feelchen

上完流式之后用什么软件分析结果？转换成长度。

daggercool

我很想下载 我现在也在做这方面的东西