求教 哪位高手做过软琼脂克隆形成实验

cookiezhang

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( s6 D3 Z/ w7 t, L/ X想知道用的是哪家公司的琼脂糖啊？

mike19840320

有个疑问，琼脂糖应该是做电泳用的，而软琼脂是做固体培养基用的，但为什么我用软琼脂就做不成功呢？？

zzc2211

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0 S; K- x3 l4 y+ p& N# O
明天我看看

embryonic12

回复 zzc2211 的帖子/ U+ Z. B- K/ ?% e9 p3 @/ Y% c
" o$ `/ ?0 z7 e8 ]
非常感谢1& ]8 O6 \" {( r( d8 ?3 L  M! V0 v: F
但是第七步不明白，为什莫要补水呢？平时养细胞为什麽不用补水呢？4 M& F8 A# b, v
甚盼指导

zzc2211

回复 cookiezhang 的帖子# P! H" ]( i. `7 p: {$ o  y/ R

* j% T: w) m7 ]& j, w4 b9 P6 d  \今天刚忙完，有点晚。% @/ {0 k; h' s5 z7 a% V7 Q
我用的这个：, Q6 @* u0 e% p3 ^! `
Biowest9 U) Z5 N/ ~8 {
Regular agarose g-10
# U1 u8 Y$ j0 \1 j7 v3 u# LLot no.:111860
1 T7 N! y6 R  Z" g

zzc2211

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, w& ?" e' d1 D7 E# @4 e/ f6 a: X3 j7 q. F+ ?* b+ C
补水的原因：soft agar克隆形成需要较长时间，从铺上细胞到克隆形成一般2周左右，我做的一个细胞10天，这是比较快的。也听说4周以上才长好的。不论你的培养箱密闭多么好，（当培养箱开关次数很多时失水尤其多）总会有一些水分蒸发，如蒸发过多，胶干细胞死亡，当你铺好凝固后，胶表面光滑平整，失水后胶表面会不同程度的高低不平，颗粒感，此时需要补水。如一次补水过多，个人认为有可能造成培养环境营养物质或离子的稀释，所以我每隔几天就少量补水。

cookiezhang

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2 ~1 |6 r& @# w/ g: W# @; O' X* b! t$ u5 q! J2 |3 }
谢谢！！

qyguoguo

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8 a& l+ R8 f1 T' [- g+ x, {! A
对不起，这个我还真不清楚，师兄留下来的，我改天帮你问问啊，

hndxws

我看到也有不铺胶的，时间可能还会短点。在什么情况下要用铺胶？什么时候可以用不铺胶的代替？请教

embryonic12

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$ t6 A9 a. E/ C: B5 G1 B你现在有没有弄清用什么公司的琼脂／琼脂糖及货号啊？