求教 哪位高手做过软琼脂克隆形成实验

mike19840320

* Q. [( B% P( P- R9 M. q: g% j5 r$ b1 _/ e
请问  哪位高手做过软琼脂克隆形成实验，应该用琼脂糖还是软琼脂，还是两种都行？我用软琼脂做，细胞不能成活，请指教。( d# G. E; C  p& A
                                                                                                                                                             谢谢！！！
+ L1 A- s* T+ b0 C: i9 u9 o

cookiezhang

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xiao6tao

低熔点琼脂糖

zzc2211

低熔点琼脂糖，下胶浓度约0.6%，上胶约0.3~0.4%

cookiezhang

琼脂糖和琼脂有什么区别吗？大家做的胶好凝固吗？我有一个同学说她的胶2天了都还没凝。我也准备做呢，哪家的胶比较好用啊？

qyguoguo

我用的是低熔点的琼脂糖，下层胶1.2, 上层胶0.7%，做的效果还可以。下层胶一般是凝固的，上层是胶冻状，细胞悬浮还可以。

embryonic12

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1 v  j$ H9 h8 v, r: u. o& I; p# P  _$ H  e' W  W
请教：下层胶1.2%是指开始配胶时的浓度呢，还是最后与培养液混合稀释完的浓度呢
  c# w; J" J' Q6 C" h2 }9 `5 a$ |" {4 K谢谢！

qyguoguo

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9 h* o/ q1 R2 R6 F
+ ?2 w( b+ d6 z  V! Y4 Y9 W上下层均为配胶浓度

zzc2211

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, K/ S  e# F; s1 }0 b% J: D6 B5 L
我的做法：1.配制2×DMEM或1640，使用时用它加入20%FBS和2倍双抗；2.不论上层胶还是下层胶，都是1份胶1份2×培养液，下层胶终浓度0.6%，你需配制1.2%的胶，上层胶终浓度0.3%，你需配制0.6%的胶；3.用6孔或12孔板做，个人喜欢6孔板，每孔下胶（0.75ml 2×培养液+0.75ml 1.2%胶）1.5ml，上胶1ml（含有0.5ml 2×培养液+0.5ml 0.6%胶+1万细胞）混悬液；4.把胶融化后放在42℃水浴锅内，保持融化状态；5.2×培养液也42℃加热，取离心管混合好下胶或上胶后，在42℃水浴锅内保持融化状态，吸取目的体积的胶入6孔板，迅速摇晃铺匀；6.铺好下胶，消化细胞计数，铺上胶；7.每3天适当补水，我3天200ul水，预防蒸发干胶。此方法很容易成功，希望对你有帮助。

cookiezhang

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9 \, r' x* H: m  i
- X* Q; L6 k& Y1 n2 J请问，你用的是什么公司的琼脂／琼脂糖啊？有没货号啊？