求教 哪位高手做过软琼脂克隆形成实验

mike19840320

7 @$ z" s: x+ P7 |; C1 v  k! b! m
; u; |/ `5 }& q. L: W
请问  哪位高手做过软琼脂克隆形成实验，应该用琼脂糖还是软琼脂，还是两种都行？我用软琼脂做，细胞不能成活，请指教。
) P0 O) p9 Z$ i% M6 N- w. q                                                                                                                                                             谢谢！！！
# [# G. d* |; v* ?7 q

cookiezhang

关注！

xiao6tao

低熔点琼脂糖

zzc2211

低熔点琼脂糖，下胶浓度约0.6%，上胶约0.3~0.4%

cookiezhang

琼脂糖和琼脂有什么区别吗？大家做的胶好凝固吗？我有一个同学说她的胶2天了都还没凝。我也准备做呢，哪家的胶比较好用啊？

qyguoguo

我用的是低熔点的琼脂糖，下层胶1.2, 上层胶0.7%，做的效果还可以。下层胶一般是凝固的，上层是胶冻状，细胞悬浮还可以。

embryonic12

回复 qyguoguo 的帖子$ J6 W1 y/ q/ H  I: w
# z  I  x/ X8 D8 q+ j, {5 I/ M
请教：下层胶1.2%是指开始配胶时的浓度呢，还是最后与培养液混合稀释完的浓度呢3 }5 z( i. ?; ^' y
谢谢！

qyguoguo

回复 embryonic12 的帖子
+ l2 u, A% P7 ^+ s: t/ r5 l
$ k& A5 R( I* L; H4 X上下层均为配胶浓度

zzc2211

回复 embryonic12 的帖子5 Q8 e8 T: f% `. @) ~

. b; ]& W% h/ V+ R4 E我的做法：1.配制2×DMEM或1640，使用时用它加入20%FBS和2倍双抗；2.不论上层胶还是下层胶，都是1份胶1份2×培养液，下层胶终浓度0.6%，你需配制1.2%的胶，上层胶终浓度0.3%，你需配制0.6%的胶；3.用6孔或12孔板做，个人喜欢6孔板，每孔下胶（0.75ml 2×培养液+0.75ml 1.2%胶）1.5ml，上胶1ml（含有0.5ml 2×培养液+0.5ml 0.6%胶+1万细胞）混悬液；4.把胶融化后放在42℃水浴锅内，保持融化状态；5.2×培养液也42℃加热，取离心管混合好下胶或上胶后，在42℃水浴锅内保持融化状态，吸取目的体积的胶入6孔板，迅速摇晃铺匀；6.铺好下胶，消化细胞计数，铺上胶；7.每3天适当补水，我3天200ul水，预防蒸发干胶。此方法很容易成功，希望对你有帮助。

cookiezhang

回复 zzc2211 的帖子$ Q. l1 ~: ?4 [- X% H. }8 C. H. W
. G/ J7 P5 K/ j1 V1 D
请问，你用的是什么公司的琼脂／琼脂糖啊？有没货号啊？