如何获得双敲的ES细胞 - 胚胎干细胞专区干细胞之家



免疫细胞治疗专区	欢迎关注干细胞微信公众号

返回列表

查看: 28528\|回复: 8	go 如何获得双敲的ES细胞 [复制链接]

歪歪

版主

Rank: 7 Rank: 7 Rank: 7

积分: 150
威望: 150
包包: 2610

楼主

发表于 2011-4-25 15:18 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

我最近在做ES基因打靶，只能得到杂合的ES细胞。但我看到文献中有用cre病毒诱导flox/flox的ES细胞敲除，想问下有人知道，这种两条染色体都插入flox的ES是如何获得的？

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 2	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

Rank: 6 Rank: 6

积分: 3495
威望: 3495
包包: 4879

优秀会员金话筒

沙发

发表于 2011-4-25 15:30 |只看该作者

可以从美国 Jackson Laboratory [网站http://www.jax.org/]等购买

回复引用

举报返回顶部

歪歪

版主

Rank: 7 Rank: 7 Rank: 7

积分: 150
威望: 150
包包: 2610

藤椅

发表于 2011-4-25 20:15 |只看该作者

晕菜，我是说怎么做，jackson lab不是万能的，好吧！( N4 `: `3 o$ ?2 O& g4 u* d+ V! b6 ^
有没有人知道啊？

回复引用

举报返回顶部

xiangchou812

中级会员

Rank: 3 Rank: 3

积分: 769
威望: 769
包包: 998

优秀会员金话筒

板凳

发表于 2011-5-14 12:16 |只看该作者

“两条染色体都插入flox的”
其实插入的应该是loxp,跟你做的方法一样，都是一条一条通过来打靶筛选的。只要其中一个发生打靶，再做嵌合体，近交来做纯合子。要知道，同时发生两各位点的打靶的几率太低了。

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 5	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

bllx58

中级会员

Rank: 3 Rank: 3

积分: 404
威望: 404
包包: 9

金话筒优秀会员

报纸

发表于 2011-6-17 12:14 |只看该作者

据我所知：一般都是做单敲ES，然后上小鼠做嵌合体，再近交出纯系吧

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 5	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

lindan666666

新手上路

Rank: 1

积分: 44
威望: 44
包包: 206

地板

发表于 2011-11-24 13:42 |只看该作者

同意上面两个楼主的说法哦，我们这也是这样做的

回复引用

举报返回顶部

usepray

注册会员

Rank: 2

积分: 100
威望: 100
包包: 339

7楼

发表于 2013-7-3 10:12 |只看该作者

双敲可遇不可求 1 你单敲的几率是多大,理论上双敲是这个机率的2次冥(实际上我感觉低的多) 2 你基因功能是否对ES状态维持或存活是必须的! T+ ~' K/ K o0 M4 t6 W

当然如果是做小鼠的话,除了进行二次打靶,杂交可以获得纯合细胞.

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 5	+ 15	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5 包包 + 15 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

concentrate123

新手上路

Rank: 1

积分: 20
威望: 20
包包: 83

8楼

发表于 2013-7-17 16:33 |只看该作者

概率事件，传统方法应该几率比较低，如果只是全敲除的话，用ZFNs，Talen等能提高效率。

回复引用

举报返回顶部

elvacxx

新手上路

Rank: 1

积分: 30
威望: 30
包包: 91

9楼

发表于 2013-7-18 11:32 |只看该作者

如果敲除效率高，多几个重复有可能出现双敲。TALENS提高效率显著。个人认为取决于该基因的敲除效率

回复引用

举报返回顶部

‹ 上一主题|下一主题 ›

返回列表

关闭 安全验证

如何获得双敲的ES细胞 [复制链接]

关闭安全验证