求胚胎干细胞的冷冻方法

congxiaoran

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/ D4 d9 N. q9 ]  Q6 V( V3 \
! q: \; a$ W# K6 x' Y, a7 Z谢谢啦

congxiaoran

回复 nculsa747 的帖子
* H* ]3 j% P& M; L! ~5 o* b9 P
' d5 }) f2 d/ D! Y: e还想问下您 那knockout DMEM 是不与SR匹配使用呢？

nculsa747

回复 congxiaoran 的帖子7 J5 S/ G1 j& F: V8 ^5 ]6 d$ S
* N8 }! r+ ~* d( M( J9 |. L
不错，是这样的。  it optimized for hESC culture.

yylhxylong

小小补充一点，如果你把细胞装进小管里面保存在液氮中的话，记得用内旋的小瓶子，用外旋的液氮有可能进去，然后cell就死翘翘了~

nculsa747

回复 yylhxylong 的帖子  [) b, ~. V. W& P, |/ ^6 D' Q) c- I
8 a+ Y2 b8 c5 F+ Y6 Z
我们用的就是CORNING的外旋2ml的管子，没有问题啊。不过你的想法是正确的！

almasun97184

玻璃化冷冻是最高效的，人的ESC的复苏率都可以达到80－90%。价格较高，且麻烦，只适合用建系之初。
7 E) u% z( R2 c: A! S1 D# K6 z普通hESC培养冷冻用10%DMSO+40%SR+50%完全培养基。
2 {4 P: i: m& U& Z6 _mESC培养冷冻用10%DMSO+40%FBS+50%完全培养基。$ k" T$ n- E9 b; V! v& t
程序冷冻最好。没条件的用冷冻盒直接放到－80度冰箱，可以缓慢降温。再不济的4度放两小时，直接丢到－80度也可以，复苏率稍微低一点儿而已。; W* J' Y% c5 d  w9 u

congxiaoran

回复 almasun97184 的帖子
, A1 ^6 `2 E' l. Y; Z- @: R: r" x# f, ^2 P0 g; {0 s8 F
谢谢

sheepthief

有没有用全培养基+100% DMSO冻存的？

sheepthief

另外，放在-80摄氏度后一定是只能一天吗？两天可不可以？有什么影响没? 谢谢

almasun97184

全培养基不好，起码要50%血清或SR（完全培养基中有20%血清）/ V) B  J, r; ]9 a
其他的成体细胞或细胞系在－80度放半年都可以，hESC最好不要。