MSC软骨分化培养基配制、诱导方法和染色方法

aoppolle

) G% a6 P! j- s/ N3 x  M5 v7 I
a)成软骨分化诱导培养基的配制+ ^1 }/ j. _1 d( ?, ~
将胎牛血清及添加物加入基础培养基配制成软骨分化诱导培养基，将配好的分化完全培养基过滤除菌，储存在4℃。
: p/ [3 M0 V* J! M: g( f+ t5 ~成软骨分化诱导基础培养基                           194 mL
3 J/ a( M/ z0 `4 D- q5 }Ascorbate（抗坏血酸）                                600μL
" L/ @7 i4 B) }. cITS                                                                                       2 mL" e/ ?, n8 k( R7 R
Dexamethasone（地塞米松  ）                          20μL
! e/ _$ b; ^- n' ~+ r! ZSodium Pyruvate（丙酮酸钠  ）                        200μL
  g  J' _8 Q& e) eProline（脯氨酸）                                    200μL
! C2 t( W  }5 K( g+ n4 ~- rTGF-β3                                                                                  2mL / `- B: O/ z9 I) W
1 M( \' y7 E. m" s
b)诱导分化
: y5 w3 d: }- t( a# L+ f1 p1)取P3代细胞，生长培养液重悬细胞，150g离心 5min；
+ ~2 a- F& U, A' i& n2)去上清，加入软骨诱导完全培养液，5.0×105/ml重悬细胞；
0 p- y' Q: q9 N3 _; d) o3)转入15ml 离心管，150g 离心 5 min；
  I- e7 {# t6 U; I( Z4)离心后，将离心管盖拧松，放入 37℃，5%CO2 中孵育；
3 ~4 L, T. F; ~) e: ~& o% Z5)每 2～3 d换诱导液，换液后轻弹细胞团使其能脱壁漂浮； ! j9 N6 i! v* N# f& [
6)诱导21d后，进行石蜡切片，脱蜡后阿利辛蓝染色；6 h3 ^) p+ l9 P, Z/ c' y

1 J% u5 {3 J) g( U3 [$ b! o/ jc)阿利辛蓝染色 , w9 Y: Z, X8 v3 B8 E4 ]
1)中性甲醛固定，石蜡包埋切片。
; M2 {- L$ t2 }0 y6 c! W0 o2 U2)石蜡切片脱蜡至水，蒸馏水冲洗。
3 p3 G. s" u) g9 Y% H3)阿利辛蓝染色液浸染 30 min。 ' E5 u4 c' ]' V, G. q+ Y! B
4)用自来水冲洗 2 min。
9 P& m5 d$ |/ @1 ?9 N( }5)蒸馏水终止染色。 0 w: K; N: e0 h0 ~8 y/ H; K$ w. Z
6)显微镜下观察染色程度，拍照( D: o0 W4 U$ q, B

黑眼豆豆

这个不就是广州某生物试剂公司成软骨完全诱导培养基的产品说明书吗？试问楼主自己做过没有，结果如何呢？

sarah19860420

回复 aoppolle 的帖子5 H7 `8 i" c2 L$ i/ s- r; m
, W3 a: K; Z9 k7 @: J3 I. b: j
问下这个TGF-β3使用的时候有什么特别要注意的吗，还是就可以直接加到分化液中就可以。今天下午我们老师说了一句消化后才加这个东西，我有点蒙，所以问下，你们都是怎么操作的。就是配置软骨分化液的时候每种试剂都往里加就可以吗，还是这个TGF-B1有什么 要特别注意的地方，望指点。O(∩_∩)O~，谢谢